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非洲豬瘟試劑盒 -一款農業(yè)部批準的試劑盒@2022已更新【?????? ??? - ???? ??? ??? @2022 ???? ??】也是我國重點防范的一類動物疫情重要部署。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達100%重要手段，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱（達40～42℃）互動講，心跳加快，監(jiān)測非洲豬瘟病毒成為豬瘟的檢測方法像一棵樹。

非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒使用說明書

（快提核酸擴增試劑盒）

【產品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸過程中，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學調查能運用。

【試劑盒組分】

1達到、試劑盒組成及貯藏條件

2又進了一步、需自備材料：生理鹽水、無菌槍頭多元化服務體系、熒光PCR專用反應管規劃、記號筆等。

【操作步驟】

一深度、樣品制備

1帶動擴大、 血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號備用開拓創新。

2持續發展、 組織樣品：采集脾臟、肝臟促進善治、淋巴結擴大、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大小）實事求是，眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨進行探討，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘服務水平，取上清液于滅菌離心管中最新，編號備用。

二處理方法、DNA提取

取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管製造業，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘關規定，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可發展基礎，若為抗凝全血，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液建強保護。

二同期、PCR擴增

1、配液：取出PCR反應液使命責任、酶混合液效果，在室溫*融化后，充分混勻合規意識，瞬離密度增加，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應液中，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用機遇與挑戰；或按照每份PCR反應液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量廣泛關註，混合兩種反應液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應管中，剩余試劑立即凍存集成技術；（操作過程要注意避光）

2就能壓製、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個循壞的55°C時收集熒光信號發展空間。設置擴增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式效果。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒有所應。)

【結果判定】

1足了準備、 基線和閾值設定；基線調整取6-15個循環(huán)的熒光信號著力提升，閾值設定以閾值線剛好超過陰性對照檢測 熒光曲線的最高點為原則深刻內涵。

2、 質量控制：反應結束后融合，陰性對照的檢測結果應無特定的擴增曲線深入闡釋，Ct值為＞38或無；陽性對照 的Ct值應≤30.0,且明顯的擴增曲線完成的事情；否則實驗視為無效物聯與互聯。

3、 樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數(shù)型增加協同控製，且結果顯示Ct值<35.0,報告為陽性振奮起來；未檢測到Ct 值或Ct值＞38或無明顯擴增曲線，則樣品判定為陰性利用好。35≤Ct值≤8時深入各系統，復檢一次，重復結果為陽性者判定為陽性系列，否則判定為陰性作用。

【注意事項】

1、實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書慢體驗，嚴格按照操作步驟執(zhí)行著力增加，在操作過程中對時間、試劑體積等精 確控制可以獲得好的結果科技實力。

2處理、 實驗室應嚴格按照有關規(guī)定分區(qū)管理。各區(qū)間人員勃勃生機、器材助力各業、試劑及空氣流向應有產格要求。

3、 有關耗材確保潔凈應用、無菌建議，核酸提取完成后盡快進入下一步試驗或冷凍保存。

4相貫通、預混后的試劑應盡量在短期內使用完畢不斷發展，戶外使用應在加冰袋的泡沫盒保存，每日試驗完畢應及時 冷凍保存自動化方案。

5緊密協作、 對于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套線上線下。

6發揮重要作用、 凍存試劑使用前應于室溫下*融化，充分混勻數據顯示，瞬時離心使液體*沉于管底高質量。

7、 樣品記得牢、陰性對照封蓋后註入了新的力量，在通風環(huán)境添加陽性對照并及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等假陽性污染服務好。

8新趨勢、 擴增反應完畢后的PCR管嚴禁開蓋,應和試驗產生的其它廢棄物一起及時收集,遠離PCR實驗室 進行無害化處理。

【規(guī)格】50頭份/盒共謀發展。

【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存學習，有效期12個月。

僅供獸醫(yī)診斷使用