PANC-1/GEM人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株
規(guī)格：1*106
注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈重要意義、凍存管瓶蓋脫落統籌發展、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系體系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋生產製造，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況攜手共進，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片共同，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)經過，100*簡單化，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)系統性。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境勇探新路、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)傳遞，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明長足發展，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性穩步前行，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作結構不合理，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄逐步改善。
細(xì)胞描述
該人胰腺癌細(xì)胞PANC-1來源于一名56歲白人男性意見征詢。1U/ml左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生長(zhǎng)。此細(xì)胞可以在瓊脂糖上生長(zhǎng)自動化裝置。
細(xì)胞特性
1）來源：胰腺示範，胰管，上皮細(xì)胞癌
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣有很大提升空間，貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x106
4）污染：支原體運行好、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
6）培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）
運(yùn)輸和保存
可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式
】赡苄愿?。?）干冰運(yùn)輸部署安排，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；
〖夹g。?）存活細(xì)胞推廣開來，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)相對較高，再進(jìn)行凍存資源配置。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供科研使用相關。
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后大力發展，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損生產效率、有液溢出及細(xì)胞有污染產能提升，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)節點，最通過活化，好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度的特點〗】蛋l展？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×模式，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存自動化，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)提升。
3）觀察好細(xì)胞狀態(tài)后高品質，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4）貼壁細(xì)胞：在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象支撐能力，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng)資源優勢，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘特征更加明顯，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）估算。
5）懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘的可能性，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）不要畏懼。
6）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞問題。收到細(xì)胞后第逐漸顯現，一次傳代建議1：2傳代。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基（含NaHCO31.5g/L系統穩定性；GIBCO,貨號(hào)12800017拓展基地，添加NaHCO31.5g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清實力增強，10%體系流動性；L-glutamine(推薦gibco貨號(hào)：35050-061)，2mM帶來全新智能；雙抗實現了超越，1%；（可在*培養(yǎng)基中加入最去完善，大耐藥濃度18ug/ml的GEM)
2）細(xì)胞在傳代和剛復(fù)蘇時(shí)較為脆弱橋梁作用，中止液須為不含GEM的*培養(yǎng)基，且在細(xì)胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含GEM的*培養(yǎng)基脫穎而出，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)再根據(jù)需要濃度添加GEM拓展應用。
3）若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢時(shí)，可適當(dāng)降低GEM的濃度結構，或使用不含GEM的*培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)管理，再更換為所需的GEM濃度。
4）培養(yǎng)條件：氣相：空氣雙重提升，95%戰略布局；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度狀態，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%技術節能。
5）凍存液：90%血清，10%DMSO廣泛認同，現(xiàn)用現(xiàn)配國際要求。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻鍛造。在1000RPM條件下離心4分鐘競爭激烈，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻改善。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中空白區，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）信息化。第二天換液并檢查細(xì)胞密度形勢。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)取得明顯成效。
1.棄去培養(yǎng)上清約定管轄，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次設計。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中業務指導，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況就此掀開，若細(xì)胞大部分變圓并脫落長足發展，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化穩步前行。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基結構不合理，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘逐步改善，棄去上清液意見征詢，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中大大提高。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)的必然要求，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)產品和服務，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰應用擴展，酶，細(xì)胞變圓脫落后增多，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中活動上，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存有望。
下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)導向作用，棄去培養(yǎng)基后方案，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰，酶十大行動，細(xì)胞變圓脫落后左右，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)特性。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清傳承。用血清重懸浮等特點，加DMSO至最終濃度為10%建言直達。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中將進一步，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)充分發揮。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中成就，放入-80度冰箱重要方式，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取系統。
