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　　智立中特(武漢)生物科技有限公司主要致力于質(zhì)粒微生物資源的保護(hù)認為、共享和持續(xù)利用，圍繞我國生命科學(xué)研究新趨勢、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展等重大需求反應能力，探索、發(fā)現(xiàn)凝聚力量、收集國內(nèi)外的微生物資源，妥善長期保存管理;在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下聽得進，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)新的力量、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)便利性、科研教育提供質(zhì)粒載體物物種資源全面展示、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù)深刻認識。旗下質(zhì)粒載體網(wǎng)是一款提供質(zhì)粒載體展示及定制的專業(yè)型網(wǎng)站核心技術，由智立中特(武漢)生物科技有限公司聯(lián)合多家企業(yè)公司科研院校共同打造!主要展示了各種基因類型下的質(zhì)粒載體!

　　1. Freestyle™ 293-F細(xì)胞的培養(yǎng)：在37℃，125rpm主動性，8% CO2的搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng);轉(zhuǎn)染當(dāng)天Freestyle™ 293-F細(xì)胞密度達(dá)到1.5-2.5×106個(gè)/ml時(shí)可以進(jìn)行轉(zhuǎn)染創造性，但細(xì)胞存活率需>95%;可以使用生產(chǎn)的臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞存活率檢測試劑盒(C0011)進(jìn)行細(xì)胞存活率檢測。

　　2. 以50ml懸浮培養(yǎng)的Freestyle™ 293-F細(xì)胞為例道路，取兩個(gè)潔凈無菌離心管規模設備，分別加入1.25ml不含抗生素和血清的Freestyle™ 293-F細(xì)胞培養(yǎng)液;然后其中一管加入50μg質(zhì)粒DNA真諦所在，另一管加入100μl Lipo293F™轉(zhuǎn)染試劑，分別用移液器輕輕吹打混勻競爭力，請(qǐng)?zhí)貏e注意不可Vortex或離心充分。將含有DNA的培養(yǎng)液用槍輕輕加入含Lipo293F™轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)液中，輕輕顛倒離心管或者用槍輕輕吹打混勻集聚，室溫靜置15分鐘(室溫存放6小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定)競爭力。

　　3. 把2.5ml Lipo293F™轉(zhuǎn)染試劑-DNA混合物全部加入到50ml懸浮培養(yǎng)的Freestyle™ 293-F細(xì)胞中積極。由于青mei素/鏈mei素雙抗可能影響重組蛋白的表達(dá)探索，通常不建議在細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)加入雙抗;如細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境容易發(fā)生污染，可酌情加入1/5常規(guī)用量的雙抗產業。

　　4. Freestyle™ 293-F細(xì)胞在37℃滿意度，125rpm，8% CO2的搖床培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48-72小時(shí)后可持續，即可收集細(xì)胞進(jìn)行目的蛋白的檢測和純化主要抓手。

　　常見問題：

　　1. 轉(zhuǎn)染效率低：

　　a. 優(yōu)化質(zhì)粒與Lipo293F™轉(zhuǎn)染試劑比例，有必要是可以適當(dāng)嘗試加大質(zhì)粒用量構建。

　　b. 應(yīng)使用高純度創新科技、無菌、無污染物的質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染共創輝煌，DNA純度方面A260/A280比值要接近1.8通常宜控制在1.8-1.9范圍內(nèi)具有重要意義，偏低則有可能有蛋白污染，偏高則有可能有RNA污染大部分姶蟮墓δ?？梢允褂蒙a(chǎn)的質(zhì)粒大量抽提試劑盒(D0026)進(jìn)行抽提，以保證可以獲得較高的轉(zhuǎn)染效率解決方案。

　　c. 需用無抗生素和無血清培養(yǎng)液配制Lipo293F™轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒的混合物優勢。

　　d. 轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)時(shí)間不足，而被誤認(rèn)為轉(zhuǎn)染效率偏低增產。懸浮狀態(tài)下的Freestyle™ 293-F細(xì)胞轉(zhuǎn)染后至顯著表達(dá)所需培養(yǎng)時(shí)間通常為48-72小時(shí)便利性。

　　e. 檢查細(xì)胞是否有支原體感染，支原體感染會(huì)影響細(xì)胞增殖行動力，并很可能影響轉(zhuǎn)染效率提供有力支撐。

　　f. 如果沒有檢測到目的蛋白表達(dá)，應(yīng)該仔細(xì)核對(duì)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的測序結(jié)果，確保測序結(jié)果和讀碼框wan全正確最深厚的底氣。

　　g. 檢查轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度是否過高協同控製。

　　2. 細(xì)胞毒性較明顯：

　　a. 目的基因的表達(dá)蛋白有毒性。此時(shí)可以和空載體轉(zhuǎn)染效果比較品質，以確定是否是目的基因蛋白表達(dá)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性利用好。如果確定有細(xì)胞毒性，可以考慮適當(dāng)減少質(zhì)粒用量解決問題，并按照比例減少Lipo293F™轉(zhuǎn)染試劑製度保障。

　　b. 檢查轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度是否太低。

　　c. 檢查細(xì)胞是否有支原體等微生物污染的有效手段。