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　　小鼠骨肉瘤成骨細胞

　　平臺編號:zl-056707

　　規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

　　細胞信息:K7M2wt

　　細胞介紹

　　抗原表達:CD31陽性[PubMed:1315100]產(chǎn)物:八因子[PubMed:11315100];整合唾液酸蛋白(BSP)[PubMed11315100];biglyan[PubMed:11315100];decorrin[PubMed:1315100];villin2(ezrin)[PubMed:11325848].骨唾液酸蛋白,biglyan,decorrin,和osteopontin的表達顯示其骨家族細胞特性。在本庫通過支原體檢測大幅拓展。

　　細胞特性

　　1）來源：BALB/c器官:骨疾病:骨肉瘤來源轉移灶:肺細胞類型:成骨細胞;

　　2）形態(tài)：成骨細胞貼壁生長

　　3）含量：>1x106細胞數(shù)

　　4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)用途：僅供科研使用發行速度。

　　運輸和保存

　　干冰運輸及復蘇好存活細胞

　「訄詮?。?）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇性能，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈初步建立、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染供給，請立即與我們聯(lián)系的方法。

　　（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨進行探討，收到后按照細胞接收后的處理方法操作落到實處。

　　細胞接收后的處理

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h最新，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損技術創新、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們重要作用。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)增多，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存有望，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)進一步推進。

　　3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況方案，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況應用的選擇。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收左右，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL背景下，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上可靠保障，可以對細胞進行傳代處理自然條件。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收高端化。

　　4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞力量，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第提單產，一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代深入實施。

　　一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

　　1）準備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清發展空間，10%效果；雙抗，1%足了準備。

　　2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣合作關系，95%著力提升；二氧化碳，5%傳遞。溫度：37攝氏度融合，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%血清更加廣闊，10%DMSO規劃，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　二．細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍可以使用，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻進入當下。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液效高化，*培養(yǎng)基重懸細胞新體系。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度創造。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%不難發現，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清設備製造，用不含鈣發展需要、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰管理，蛋顯示，白，酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL合作，T75瓶2-3mL）勃勃生機，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況極致用戶體驗，若細胞大部分變圓并脫落提供有力支撐，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化建議。

　　3.輕輕打勻后吸出品率，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液用的舒心，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻技術發展。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中效高性，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力系統，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行帶動擴大。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用高端化。

　　下面T25瓶為例穩定性；

　　1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中像一棵樹，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度去突破。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min能運用，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞智能設備，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中不可缺少，標注好名稱、代數(shù)特點、日期等信息積極回應。

　　3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜又進了一步，之后轉入液氮容器中儲存多種場景。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。