細(xì)胞名稱3T6-Swissalbino(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)
種屬小鼠
年齡(性別)胚胎
組織來源胚胎部署安排;成纖維細(xì)胞生長特性貼壁細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣背景描述3T6-Swissalbino細(xì)胞是于1963年從分解的瑞士小鼠胚胎中建立的,3T6-Swissalbino細(xì)胞能分泌膠原質(zhì)和透明質(zhì)酸技術。檢測表明推廣開來,3T6-Swissalbino細(xì)胞肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。
生長培養(yǎng)基DMEM高糖+10%FBS+1%P/S
培養(yǎng)條件氣相:空氣相對較高,95%資源配置;CO2,5%溫度:37℃
細(xì)胞收到后處理:
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖钕嚓P,?/span>辦法大力發展。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝生產效率,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)產能提升,嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時節點。鏡下觀察:未超過80%匯合度時通過活化,可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml*培養(yǎng)基的特點,放入37℃健康發展、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時大數據,根據(jù)情況傳代或者凍存長效機製,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話數字技術,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松奮戰不懈,傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍措施,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻大大縮短。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液更高要求,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻越來越重要的位置。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中)新技術,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度不要畏懼。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%服務為一體,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1逐漸顯現、對于貼壁細(xì)胞全會精神,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣拓展基地、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次集中展示。
2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min體系流動性,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況探索創新,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺實現了超越,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化新產品。
3.輕輕吹打細(xì)胞,*脫落后吸出橋梁作用,在1000RPM條件下離心8-10分鐘長遠所需,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻讓人糾結。
4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液規模,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。