【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。在預(yù)包被人星狀病毒抗原(固相抗原高質量,貨號(hào):INS1070004C)的微孔酶標(biāo)板中提供了有力支撐,加入人星狀病毒陰陽(yáng)性性對(duì)照(貨號(hào):INS1070004J)和待測(cè)樣本,溫育洗滌前景,再加入另一株HRP標(biāo)記的抗人星狀病毒抗體(酶標(biāo)抗體進一步意見,貨號(hào):INS1070004E),經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌共享應用,去除未結(jié)合的組分生產能力,在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B示範推廣,底物在HRP催化下堅持好,產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,在終止液(2M 硫酸)作用下持續向好,終轉(zhuǎn)化為黃色習慣,在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測(cè)樣品中人星狀病毒的濃度正相關(guān)進一步推進,通過(guò)計(jì)算公式判斷樣品陰陽(yáng)性導向作用。
【主要組成成分】
主要成分
組分 | 數(shù)量 | 主要成分 |
陰性對(duì)照 | 0.5ml/管 | 不含待測(cè)物的緩沖液 |
陽(yáng)性對(duì)照 | 0.5ml/管 | 含待測(cè)物的緩沖液 |
包被微孔板 | 96T | 預(yù)包被固相抗原 |
HRP標(biāo)記抗體 | 6mL | HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體 |
底物液A | 6mL | 過(guò)氧化脲工作液 |
底物液B | 6mL | TMB工作液 |
* | 6mL | 緩沖液 |
終止液 | 6mL | 硫酸稀釋液 |
20×濃縮洗滌液 | 30mL | 含0.15%Tween20的PBS |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | -- |
自封袋 | 1個(gè) | -- |
不干膠 | 2片 | -- |
陰陽(yáng)性對(duì)照已經(jīng)通過(guò)測(cè)試,結(jié)果表明HBs抗原陰性應用的選擇,HIV1十大行動、HIV2和HCV抗體陰性,由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠*保證沒(méi)有這些物質(zhì)背景下,本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理綜合措施,處理過(guò)程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1自然條件、酶標(biāo)儀
2設計標準、精密移液器及一次性吸頭
3開展、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5發揮重要帶動作用、37℃水浴鍋或恒溫箱
6意向、500ml量筒
7、無(wú)粉一次性乳膠手套
8文化價值、質(zhì)控品(可以從藍(lán)圖生物選擇形式,貨號(hào):INS1070004Q)
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1、2-8℃保存不斷完善,切勿冷凍數字化,有效期6個(gè)月。
2基礎上、開(kāi)封使用后各領域,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋保持競爭優勢,并將全部試劑放回2-8℃冰箱進行培訓。
3、開(kāi)封后不容忽視,按照建議的條件保存組織了,校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體說服力,有效期為28天紮實,其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀新體系,如Thermo MK3投入力度,或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南不難發現。所有樣本采集過(guò)程中貢獻法治,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1發展需要、細(xì)胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min攻堅克難,去除細(xì)胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下顯示,避免反復(fù)凍融雙向互動。
2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管設計能力,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激品牌,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清更為一致,保存在- 20℃以下等形式,避免反復(fù)凍融技術的開發。
3、血漿:肝素飛躍,EDTA更高效,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下組成部分,離心20分鐘取上清影響,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融的過程中。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲(chǔ)存72h廣泛關註,或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月促進進步。樣本收集后,不是一次檢測(cè)完優勢領先,請(qǐng)按一次用量分裝凍存迎來新的篇章,避免反復(fù)凍融,使用時(shí)在室溫下解凍推動並實現,確保樣品均勻充分解凍蓬勃發展。
【檢驗(yàn)方法】
試劑準(zhǔn)備
1、使用前積極回應,所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫2h重要性,確保充分復(fù)溫到室溫。
2多種場景、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液多元化服務體系,會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生,這屬于正硵U大公共數據,F(xiàn)象深度,水浴加熱使結(jié)晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水核心技術體系,按1:20稀釋開拓創新,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水必然趨勢。
3促進善治、底物:底物液A和B,在使用前的方法,按1:1體積充分混合實事求是,混合后15分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1落到實處、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫服務水平,標(biāo)準(zhǔn)品最新、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔處理方法。
2重要作用、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液習慣。
3充足、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱的積極性。
4綠色化發展、設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照孔、樣本孔不久前,陰陽(yáng)性對(duì)照孔各加對(duì)照品50μL用上了,樣本孔加樣本50μL。
5合規意識、用封板膜蓋住反應(yīng)板密度增加,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
6創新內容、揭開(kāi)封板膜機遇與挑戰,棄去液體,吸水紙上拍干善於監督,每孔加滿洗滌液集成技術,靜置20s,甩去洗滌液至關重要,吸水紙上拍干發展空間,如此重復(fù)4次(共洗板5次)。若使用自動(dòng)洗板機(jī)有所應,請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板足了準備,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測(cè)的精度著力提升。洗板結(jié)束深刻內涵,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上融合,充分拍干反應(yīng)板深入闡釋。
7、所有孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL完成的事情。
8物聯與互聯、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8供給、揭開(kāi)封板膜優勢與挑戰,棄去液體,吸水紙上拍干解決方案,每孔加滿洗滌液趨勢,靜置20s,甩去洗滌液上高質量,吸水紙上拍干一站式服務,如此重復(fù)4次(共洗板5次)。若使用自動(dòng)洗板機(jī)深入交流,請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板智能化,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測(cè)的精度流程。洗板結(jié)束合作,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上助力各業,充分拍干反應(yīng)板。
9提供有力支撐、將底物A和B按1:1體積充分混合應用,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板品率,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min相貫通。
10、所有孔加入終止液50μL積極影響,在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度(OD值)自動化方案。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測(cè)完成后,以陰性對(duì)照的OD+0.25越來越重要,做為閾值線上線下,樣本OD值大于閾值,為陽(yáng)性醒悟;樣本OD值低于閾值為陰性數據顯示。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1、僅供科研使用也逐步提升,不得用于臨床診斷記得牢。
2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用重要的作用,過(guò)期產(chǎn)品不得使用更多可能性。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用足夠的實力。
4緊迫性、使用試劑盒配套的樣品稀釋液結構。
5、如果樣本值高于大標(biāo)準(zhǔn)品濃度值多元化服務體系,請(qǐng)將樣本適當(dāng)稀釋后規劃,再重新測(cè)定。
6便利性、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果全面展示,檢測(cè)前,請(qǐng)排除該因素深刻認識。
7核心技術、通過(guò)其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果,與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性主動性。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1創造性、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物道路。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝規模設備,無(wú)破損漏氣。
2指導、陰性結(jié)果
陰性對(duì)照的OD值不高于0.2競爭力。
3、陽(yáng)性結(jié)果
陽(yáng)性對(duì)照的OD值不低于0.8進一步完善。
4集聚、特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組人星狀病毒,與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉調整推進。
5狀況、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存,有效期6個(gè)月機製。
【注意事項(xiàng)】
生物安全
1全過程、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴(yán)格防止交叉污染使命責任,所有樣品效果、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。
2合規意識、試劑盒的液體組分中密度增加,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)創新內容,避免吸入煙霧與皮膚接觸機遇與挑戰。
3、底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用集成技術,避免吸入煙霧就能壓製。戴上防護(hù)手套,實(shí)驗(yàn)完成后*洗手大部分。
技術(shù)提示
1強大的功能、混合蛋白溶液時(shí),避免起泡解決方案。
2優勢、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí),每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭增產,公共組分應(yīng)該懸臂加樣便利性,避免交叉污染。
3行動力、合適的溫育時(shí)間提供有力支撐,和充分的洗滌步驟,是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件保供。
4自行開發、底物溶液為無(wú)色液體,保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色責任,代表底物溶液已經(jīng)失效品質,不得使用。
5深入各系統、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序*,加入終止液后系列,藍(lán)色底物產(chǎn)物作用,會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。
6慢體驗、實(shí)驗(yàn)中著力增加,用剩的板條,應(yīng)立即放回自封袋中科技實力,密封(低溫干燥)保存處理。
7、所有液體組分在此基礎上,使用前充分搖勻助力各行,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作自主研發。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑確定性,所有污染性的一次性材料,應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級(jí)別發展,進(jìn)行廢物和污物的處理保持穩定,同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對(duì)待所有的廢物和污物。