*0 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞 南京賽泓瑞生物在感受態(tài)細胞的研發(fā)方面廣泛關註，實力雄厚促進進步，擁有了克隆、表達優勢領先、酵母和農(nóng)桿菌4大類迎來新的篇章，共計百余種感受態(tài)細胞。在電擊感受態(tài)方面推動並實現，擁有了大腸桿菌 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類蓬勃發展，*提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫構建方面的成功率。

*0 Electro
*0 Electroporation-Competent Cell
產(chǎn)品規(guī)格:

*0 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU  galK

rpsL (Strr)endA1 nupG

*0 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)簡要說明：

*0 電擊感受態(tài)細胞只能用于電擊轉(zhuǎn)化積極回應，不能用于熱激轉(zhuǎn)化重要性。-CMbio-

*0 來源于 MC1061 菌株，是目前實驗室常用的感受態(tài)細胞之一多種場景，基因型與 DH10B 高度類似 (DH10B 為 galE15 型多元化服務體系，而 *0 為 galU 型)。*0 生長速度快 (比 DH5α快擴大公共數據，但比 Mach1-T1 生長速度慢)深度，10 小時可見克隆。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取核心技術體系￠_拓創新？捎糜跇嫿寺。{白斑篩選等實驗必然趨勢，具有鏈 霉素抗性促進善治。-CMbio-

1. -CMbio-*0 電擊感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達 1×1010 cfu/μg DNA的方法。

*0 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)操作說明：

1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘實事求是，待其瀝干水分，正置 5 分鐘落到實處，使乙 醇充分揮

發(fā)服務水平，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中最新，壓實冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋處理方法，冰中 靜置 5 分鐘充分降溫重要作用。

2. 取-80℃保存的 *0 電擊感受態(tài)細胞插入冰中 5 分鐘，待其融化習慣，加入目的 DNA (質(zhì)脸渥?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手EP 管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡的積極性，立即插入冰中綠色化發展。-CMbio-
A. 測定轉(zhuǎn)化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對照質(zhì)粒  pUC19；-CMbio-

B. 對于連接產(chǎn)物不久前，請用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 懸用上了，DNA 濃 度不超過 100 ng/μl，體積不超過 5 μl/50 μl 感受態(tài)合規意識。-CMbio-
3. 用 200 μl 槍頭(用刀切除 0.5cm 槍尖)將感受態(tài)-DNA 混合物快速移到電擊杯中密度增加，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋創新內容。

4. 啟動電轉(zhuǎn)儀機遇與挑戰，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω善於監督，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀*參數(shù)集成技術，也可按所用 電轉(zhuǎn)儀 *的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中至關重要，電擊完成快速插入冰中發展空間。-CMbio-
5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯效果，放室溫有所應，加入 1ml 不含抗生素的無菌 S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用 1ml 槍吹吸電擊杯 底部數(shù)次混勻后合作關系，轉(zhuǎn)移到 50 ml 離心管（BD Falcon 50 ml 錐形離心管等）著力提升，向離心管中 補加 S.O.C. 培養(yǎng)基至 10 ml。 傾斜 45 度放入搖床傳遞，37℃融合，225 rpm 復蘇 60 分鐘。-CMbio-
6. 5000 rpm 離心一分鐘收菌相關性，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大完成的事情， 若全部涂 板請選用直徑 15cm 培養(yǎng)皿 2-5 個）。將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng) 13-17 小時穩定。-CMbio

*0 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)注意事項：
1.  加入 DNA 時體積不應大于感受態(tài)體積的 1/10改造層面。 -CMbio-

2. 電擊感受態(tài)細胞加入電擊杯應避免產(chǎn)生氣泡供給，氣泡會增加弧光放電風險。-CMbio-

3. 當 DNA 不純或存在鹽經驗分享，乙醇解決方案，蛋白及緩沖液等污染時，轉(zhuǎn)化效率急劇下降有力扭轉。-CMbio-

4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導上高質量，增大在含有細胞和 DNA 的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風險。

5. 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)翉V度和深度；蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率深入交流，*使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒。質(zhì)粒增大一倍科技實力，轉(zhuǎn)化效率下降一個 數(shù)量級流程。-CMbio-
6. 對于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化前乙醇沉淀 DNA 后用適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產(chǎn) 物勃勃生機，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl助力各業。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉(zhuǎn)化效率，增加弧光放電的風險提供有力支撐。 7. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作應用，吸取感受態(tài)細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜品率，降低轉(zhuǎn)化效率相貫通。轉(zhuǎn)化高濃

度的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量積極影響。-CMbio-

8. 電擊感受態(tài)細胞保存在-80℃以下自動化方案，高于-80℃超期儲存會導致轉(zhuǎn)化效率會下降。-CMbio-