應(yīng)用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡觀察多種生物活性物質(zhì)對門細胞內(nèi)鈣的影響
應(yīng)用觀察多種生物活性物質(zhì)對門細胞內(nèi)鈣的影響
細胞內(nèi)離于鈣濃度的變化是鈣信號作為細胞通訊第二信使的物質(zhì)基礎(chǔ),因而測定靜止態(tài)和激活態(tài)細胞中離子鈣濃度十分重要促進進步。過去發力,人們采用生物發(fā)光蛋白優勢領先、金屬餡指示劑迎來新的篇章、ca’選擇性微電極等方法只能采用微注射方法觀察少數(shù)大型細胞的離子鈣。80年代以來推動並實現,隨著ca2’特異熒光指示劑和顯微熒光光度計的聯(lián)合應(yīng)用薄弱點,人們才開始通過對細胞無刨性納(:az’測定方法研究ca”信號。直到zui近幾年優化程度,徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡的應(yīng)用大大加速了人們對單個細胞離子鈣及其亞細胞區(qū)域分布的研究積極性。應(yīng)用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡和ca”特異的熒光指示劑f1Mo—3,可觀察多種生物活性物質(zhì)對1不斷豐富。I工—PN細胞離子鈣的影響實施體系。I上c—PKl細胞是來源十豬腎小管1:皮的細胞系,已得到學(xué)術(shù)界的*各有優勢。它與近端小管上皮細胞有一些相同的轉(zhuǎn)運功能效果較好,而其對刺激的反應(yīng)卻與亨氏拌升支粗段相似。因此,人們常用N上PRl細胞代替近端小管上皮細胞研究物質(zhì)的轉(zhuǎn)運等多個領域,而代替亨氏拌升文物段上皮細胞研究其對激素的反應(yīng)再獲。上也有人應(yīng)用I‘I‘c—PKl細胞研究腎小管上皮細胞的細胞內(nèi)鈣信使。u應用擴展,c—PKl細胞在20mm以內(nèi)特與外界交換50%的細胞總鈣體驗區,剩余的細胞鈣與外界交換較侵,稱為侵交換鈣池活動上。在細胞核有望、高爾基器以及胞漿的其它區(qū)域,均包括快交換鈣池和慢交換鈣他兩部分導向作用。
用*加壓素(AvP)標準,在富鈣環(huán)境中培養(yǎng)的I,I處理方法,c—PKl細胞如果不受外界刺激重要作用,其細胞核和細胞質(zhì)的離子鈣濃度是一樣的;受到AvP習慣、ATP或EIrF刺激后充足,細胞總離于鈣過性增高刷巳細胞核離子鈣升高較細胞質(zhì)離子鈣升高更為突出。然而的積極性,在無鈣的條件r培養(yǎng)兒I‘cPxl細胞受刺激后雖然仍出現(xiàn)一過性的總離子鈣升高綠色化發展,但細胞核和細胞質(zhì)離子鈣升高的幅度差別不大。在徠卡激光共聚焦顯微鏡進一步研究發(fā)現(xiàn)不久前,無論在無鈣還是富鈣的環(huán)境中用上了,而用AVP預(yù)處理后,再用人TP刺激N能力建設。C—PKl細胞所引起的離子鈣變化總不如未用AvP處理時關註。不同生物活性物質(zhì)的受體類型不同,它們和1用的磷酸脂酶c同工酶也不同無障礙,從而導(dǎo)致不同鈣庫的動員連日來。
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