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非洲豬瘟試劑盒-一款用于豬瘟快速檢測的非洲豬瘟試劑盒#2022已更新????????????? - ???????????????????#???2022 ????????????????????????

非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒使用說明書

（快提核酸擴增試劑盒）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸更多的合作機會，適用于非洲豬瘟病毒的檢測、輔助診斷和流行病學調(diào)查認為。

【試劑盒組分】

1服務好、試劑盒組成及貯藏條件

【操作步驟】

一大局、樣品制備

1、 血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品邁出了重要的一步，編號備用有序推進。

2設施、 組織樣品：采集脾臟、肝臟堅定不移、淋巴結(jié)組合運用、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大小）指導，眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨競爭力，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘進一步完善，取上清液于滅菌離心管中，編號備用競爭力。

二調整推進、DNA提取

取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻敢於挑戰，室溫（20°C左右）靜置3分鐘不斷創新，加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可，若為抗凝全血提供了遵循，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液參與水平。

二、PCR擴增

1服務效率、配液：取出PCR反應(yīng)液明確相關要求、酶混合液，在室溫*融化后統籌發展，充分混勻深化涉外，瞬離，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中生產製造，充分混勻開展試點，瞬離后按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量共同，混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應(yīng)管中推進一步，剩余試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）

2簡單化、加樣擴增：分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照力度，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個循壞的55°C時收集熒光信號。設(shè)置擴增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式優勢。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒善謀新篇。)

【結(jié)果判定】

1、 基線和閾值設(shè)定便利性；基線調(diào)整取6-15個循環(huán)的熒光信號方法，閾值設(shè)定以閾值線剛好超過陰性對照檢測 熒光曲線的最高點為原則行動力。

2、 質(zhì)量控制：反應(yīng)結(jié)束后切實把製度，陰性對照的檢測結(jié)果應(yīng)無特定的擴增曲線保供，Ct值為＞38或無；陽性對照 的Ct值應(yīng)≤30.0,且明顯的擴增曲線進行部署；否則實驗視為無效責任。

3、 樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數(shù)型增加保護好，且結(jié)果顯示Ct值<35.0,報告為陽性應用前景；未檢測到Ct 值或Ct值＞38或無明顯擴增曲線，則樣品判定為陰性運行好。35≤Ct值≤8時首次，復檢一次，重復結(jié)果為陽性者判定為陽性部署安排，否則判定為陰性搖籃。

【注意事項】

1、實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書推廣開來，嚴格按照操作步驟執(zhí)行推動，在操作過程中對時間、試劑體積等精 確控制可以獲得好的結(jié)果資源配置。

2信息、 實驗室應(yīng)嚴格按照有關(guān)規(guī)定分區(qū)管理。各區(qū)間人員相互融合、器材首要任務、試劑及空氣流向應(yīng)有產(chǎn)格要求。

3不同需求、 有關(guān)耗材確保潔凈發展、無菌，核酸提取完成后盡快進入下一步試驗或冷凍保存總之。

4面向、預混后的試劑應(yīng)盡量在短期內(nèi)使用完畢，戶外使用應(yīng)在加冰袋的泡沫盒保存研學體驗，每日試驗完畢應(yīng)及時 冷凍保存建設項目。

5、 對于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸落實落細，檢測過程中使用不帶熒光物質(zhì)一次性乳膠手套相結合。

6、 凍存試劑使用前應(yīng)于室溫下*融化製高點項目，充分混勻為產業發展，瞬時離心使液體*沉于管底範圍和領域。

7、 樣品各項要求、陰性對照封蓋后更高要求，在通風環(huán)境添加陽性對照并及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等假陽性污染講理論。

8的可能性、 擴增反應(yīng)完畢后的PCR管嚴禁開蓋,應(yīng)和試驗產(chǎn)生的其它廢棄物一起及時收集,遠離PCR實驗室 進行無害化處理。

【規(guī)格】50頭份/盒服務為一體。

【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存問題，有效期12個月。

僅供獸醫(yī)診斷使用