流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置分析。它可以快速測量、存貯全面闡釋、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理非常激烈、生物化學方面的特征參量,并可以根據(jù)預選的參量范圍把特定的細胞亞群從中分選出來引人註目。
流式細胞儀主要由四部分組成領域。它們是:流動室和液流系統(tǒng)、激光源和光學系統(tǒng)好宣講、光電管和檢測系統(tǒng)註入新的動力、計算機和分析系統(tǒng)。
流動室和液流系統(tǒng)
流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成雙重提升,常用光學玻璃、石英等透明事關全面、穩(wěn)定的材料制作表現明顯更佳。設計和制作均很精細,是液流系統(tǒng)的心臟技術節能。樣品管貯放樣品指導,單個細胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射出;鞘液由鞘液管從四周流向噴孔國際要求,包圍在樣品外周后從噴嘴射出增持能力。為了保證液流是穩(wěn)液,一般限制液流速度υ<10m/s行業內卷。由于鞘液的作用,被檢測細胞被限制在液流的軸線上。流動室上裝有壓電晶體的過程中,受到振蕩信號可發(fā)生振動發展契機。
激光源和光學系統(tǒng)
經特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈和激光促進進步;激光器又以氬離子激光器為普遍發力,也有配和氪離子激光器或染料激光器。光源的選擇主要根據(jù)被激發(fā)物質的激發(fā)光譜而定迎來新的篇章。汞燈是常用的弧光燈共創美好,其發(fā)射光譜大部分集中于300~400nm,很適合需要用紫外光激發(fā)的場合薄弱點。氬離子激光器的發(fā)射光譜中覆蓋範圍,綠光514nm和藍光488nm的譜線*,約占總光強的80%積極性;氪離子激光器光譜多集中在可見光部分奮勇向前,以647nm較強。免疫學上使用的一些熒光染料激發(fā)光波長在550nm以上實施體系,可使用染料激光器組建。將有機染料做為激光器泵浦的一種成份,可使原激光器的光譜發(fā)生改變以適應需要即構成染料激光器效果較好。
光電管和檢測系統(tǒng)
經熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的重要的意義。光電倍增管(PMT)最為常用。PMT的響應時間短等多個領域,僅為ns數(shù)量級再獲;光譜響應特性好,在200~900nm的光譜區(qū)提供了有力支撐,光量子產額都比較高激發創作。光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調節(jié) ,因此對弱光測量十分有利進一步意見。光電管運行時特別要注意穩(wěn)定性問題增幅最大,工作電壓要十分穩(wěn)定,工作電流及功率不能太大生產能力。一般功耗低于0.5W標準;最大陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進行暗適應處理堅持好,并注意良好的磁屏蔽即將展開。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT,因為光譜響應特性不同習慣,不宜互換充足。也有用硅光電二極管的進展情況,它在強光下穩(wěn)定性比PMT好。
從PMT輸出的電信號仍然較弱綠色化發展,需要經過放大后才能輸入分析儀器至關重要。流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關系用上了,稱為線性放大器提升行動。線性放大器適用于在較小范圍內變化的信號以及代表生物學線性過程的信號,例DNA測量等關註。另一類是對數(shù)放大器研究進展,輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關系。在免疫學測量中常使用對數(shù)放大器連日來。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性快速融入、陽性和強陽性三個亞群,它們的熒光強度相差1~2個數(shù)量級意向;而且在多色免疫熒光測量中意料之外,用對數(shù)放大器采集數(shù)據(jù)易于解釋。此外還有調節(jié) 便利形式、細胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu)點置之不顧。
計算機和分析系統(tǒng)
經放大后的電信號被送往計算機分析器。多道的道數(shù)是和電信號的脈沖高度相對應的數字化,也是和光信號的強弱相關的方便。對應道數(shù)年縱坐標通常代表發(fā)出該信號的細胞相對數(shù)目。多道分析器出來的信號再經模-數(shù)轉換器輸往微機處理器編成數(shù)據(jù)文件各領域,或存貯于計算機的硬盤和軟盤上應用領域,或存于儀器內以備調用。計算機的存貯容量較大進行培訓,可存貯同一細胞的6~8個參數(shù)發展機遇。存貯于計算機內的數(shù)據(jù)可以在實測后脫機重現(xiàn),進行數(shù)據(jù)處理和分析法治力量,最后給出結果全技術方案。除上述四個主要部分外,還備有電源及壓縮氣體等附加裝置共享。
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