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SYBR Green I (PCR級(jí)創新的技術,10000X)產(chǎn)品說明:
SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結(jié)合的熒光染料研究成果,是熒光定量PCR常用的DNA結(jié)合染料深刻認識。在定量 PCR中優化上下,SYBR Green I可與雙鏈DNA(dsDNA)非特異性結(jié)合后發(fā)出熒光真正做到,則可以通過檢測反應(yīng)體系中的SYBR Green I 熒光強(qiáng)度設備製造,達(dá)到檢測PCR 產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的連日來。游離狀態(tài)下喜愛,SYBR Green I發(fā)出微弱的熒光醒悟,一旦與dsDNA結(jié)合,其熒光增加1000倍高質量,一個(gè)反應(yīng)發(fā)出的全部熒光信號(hào)與出現(xiàn)的dsDNA量成比例也逐步提升,且會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn)物的增加而增加;所以通過檢測PCR 反應(yīng)液中的熒光信號(hào)強(qiáng)度智能設備,可以對(duì)目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量不可缺少,同時(shí)還可以測定擴(kuò)增的目的DNA片段的熔解溫度。
使用說明:
使用時(shí)特點,配置PCR反應(yīng)混合液積極回應,將10000×SYBR Green I濃縮液加入到PCR反應(yīng)體系,使終濃度為0.5× (0.2×到1×之間調(diào)整)又進了一步。以上操作建議在冰上進(jìn)行多種場景。
注:① 反應(yīng)液配制方法和PCR 擴(kuò)增條件請(qǐng)參照DNA聚合酶使用說明。
② Realtime PCR 擴(kuò)增儀的使用方法規劃,請(qǐng)參照各儀器說明書擴大公共數據。
SYBR Green I (PCR級(jí),10000X)注意事項(xiàng):
使用濃度對(duì)熒光PCR結(jié)果的影響
SYBR Green I的使用濃度是保證熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)成功非常關(guān)鍵的因素帶動擴大。如果SYBR Green I的濃度過低會(huì)使熒光信號(hào)的變化降低核心技術體系,這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出開拓創新;而在高濃度時(shí),將會(huì)抑制PCR反應(yīng)必然趨勢,降低PCR反應(yīng)效率促進善治。所以一般在使用SYBR Green I時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況優(yōu)化使用濃度,反應(yīng)的終濃度為0.2×到1×之間多樣性。
鎂離子濃度的影響
提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對(duì)PCR反應(yīng)的抑制作用發揮效力。我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時(shí),鎂離子濃度比無SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)高出0.5~3mM明顯。