色譜柱的使用:
色譜柱是昂貴的色譜耗材使用,正確的使用和維護(hù)對(duì)保證色譜柱的正常使用和延長(zhǎng)壽命至關(guān)重要合規意識。
1、色譜柱使用前注意事項(xiàng):
○1色譜柱內(nèi)的存儲(chǔ)液:
色譜柱看的存儲(chǔ)液基本情況,如沒(méi)有特殊說(shuō)明均為質(zhì)檢報(bào)告中所述流動(dòng)相現場,
氨基(NH2)、氰基(CN)力量、硅膠柱(SiO2)均為正相條件–正己烷/異丙醇體系我有所應,反相柱(C1、C4深入實施、C8至關重要、C18、苯基Phenyl)均為甲醇/水體系效果,檢測(cè)前有所應,請(qǐng)用相互溶的試劑將其替換;
○2新色譜柱的平衡:
新反相色譜柱:用純甲醇沖洗色譜柱30個(gè)柱體積合作關系,再更換成能與檢測(cè)流動(dòng)相互溶的流動(dòng)相沖洗30個(gè)柱體積敢於監督,后用流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線(xiàn)平穩(wěn);
新的正相色譜柱:用異丙醇0.5ml/min沖洗30個(gè)柱體積結構,再更換成檢測(cè)流動(dòng)相穩(wěn)定系統(tǒng)至基線(xiàn)平穩(wěn)重要的作用;
○3流動(dòng)相和樣品保持潔凈:
由于懸浮在樣品或流動(dòng)相中的細(xì)小顆粒會(huì)堵塞色譜柱兩端的篩板貢獻,各種試劑盡量使用色譜純級(jí)的,用量少的試劑純度至少是分析純穩中求進,水是超純水和全玻璃器皿雙蒸水統籌,使用前建議用0.45μm的濾膜過(guò)濾;樣品溶液使用針筒過(guò)濾協同控製;
樣品中的雜質(zhì)是造成色譜柱污染振奮起來、柱效下降的主要原因之一,復(fù)雜樣品可選樣品預(yù)處理柱(SPE柱)進(jìn)行樣品處理利用好,如果不方便處理深入各系統,使用相匹配的保護(hù)柱,樣品溶劑與流動(dòng)相要相匹配尤為突出,不能出現(xiàn)樣品不互溶規定,極性相差太大等想象,否則會(huì)造成色譜峰形變差空間載體,鬼峰等現(xiàn)象高質量,使用流動(dòng)相溶解樣品能有效的避免上述情況發(fā)生;
○4色譜柱允許使用的pH范圍:
每款色譜柱都有自己特定允許使用的pH范圍重要組成部分,請(qǐng)仔細(xì)對(duì)照你的色譜柱的使用pH范圍流程,在pH范圍以外使用,會(huì)使硅膠基質(zhì)溶解或鍵合相水解勃勃生機,對(duì)色譜柱造成不可恢復(fù)的損傷助力各業,如果在臨界pH處使用,分析結(jié)束后立即用適合于色譜柱保存并與當(dāng)前使用的流動(dòng)相互溶的淋洗液置換掉提供有力支撐。
表一
色譜柱型號(hào)
| C8
| C18
| NH
| CN
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pH耐受范圍
| 2-10.0
| 2-10.0
| 1.5-9
| 1.5-8.5
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色譜柱的保存:○1短時(shí)間保存:使用間隔不超過(guò)四天應用,色譜柱按平時(shí)維護(hù)程序沖洗至基線(xiàn)平穩(wěn),反相色譜柱保存在不帶有緩沖鹽品率、離子對(duì)試劑的有機(jī)相/水溶液中相貫通,有機(jī)相不低于20%;正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中積極影響,反相使用保存在純有機(jī)溶劑中自動化方案;并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
○2*保存:反相色譜柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中工藝技術;正相色譜柱正相使用保存在純正己烷中效率,反相使用時(shí)需將柱內(nèi)存儲(chǔ)液用異丙醇置換,后用正己烷保存近年來;將色譜柱從儀器上取下講道理,并將隨柱的塑料堵頭旋緊密封。
色譜柱的維護(hù):1、柱壓升高是每個(gè)色譜工作者都很頭疼的問(wèn)題全面革新,長(zhǎng)時(shí)間使用造成柱壓的緩慢升高通常是正匙饔?,F(xiàn)象;短時(shí)間甚至是突然的柱壓升高通常是異常升高行業分類,排除儀器的故障,確定是色譜柱自身原因提高鍛煉,一般有以下幾點(diǎn):
○1柱頭的過(guò)濾篩板污染(固體顆粒物堵塞發展邏輯、強(qiáng)保留物質(zhì)累積):
解決方法:
a、在柱前端加上在線(xiàn)過(guò)濾器或保護(hù)柱有所提升,用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向沖洗色譜柱180min聽得進;
b、在柱前端加上在線(xiàn)過(guò)濾器或保護(hù)柱先進水平,反向使用便利性;
c、可將柱頭打開(kāi)重要平臺,將色譜柱頭中過(guò)濾篩板取出深刻認識,在稀硝酸溶液內(nèi)超聲清洗20min,純水超聲清洗20min應用提升,后用甲醇超聲清洗20min主動性,重新裝入色譜柱;
○2柱頭填料污染(固體顆粒物堵塞發展的關鍵、強(qiáng)保留物質(zhì)累積):
解決方法:
a道路、用可以溶解污染物的溶劑較長(zhǎng)時(shí)間(180min)反向沖洗色譜柱;
b真諦所在、可將柱頭打開(kāi)指導,小心取出被污染的填料,用相同的填料重新裝入修復(fù)充分;
○3pH使用不當(dāng)造成的損傷:
解決方法:
pH使用不當(dāng)造成固定相的缺失或塌陷進一步完善,很難使色譜柱恢復(fù),只能更換色譜柱需求。
2堅定不移、使用保護(hù)柱和在線(xiàn)過(guò)濾器:
樣品和流動(dòng)相中不能*過(guò)濾掉及泵磨損、密封圈和管路老化產(chǎn)生的固體顆粒物更讓我明白了,進(jìn)入到色譜柱中就會(huì)堵塞篩板指導,導(dǎo)致柱壓升高,柱效下降增產,保護(hù)柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板先進的解決方案,孔徑與分析柱的孔徑相同,能阻止顆粒物到達(dá)色譜柱滿意度,在分析故障中情況較常見,柱壓升高占很大比例可持續,因此建議您在色譜柱前端加上在線(xiàn)過(guò)濾器或者保護(hù)柱;
3體製、緩沖鹽的正確使用:
緩沖鹽通常易溶于水構建,難溶于有機(jī)溶劑,其使用不當(dāng)會(huì)析出服務延伸,加快泵柱塞桿和密封圈共創輝煌,流通閥的磨損,堵塞色譜柱頭篩板進一步,填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的間隙大部分,使填料板結(jié)柱壓升高,阻礙基質(zhì)上鍵合相的碳鏈自由舒展實際需求,使色譜柱保留能力下降解決方案,柱效降低,縮短其使用壽命善謀新篇,緩沖鹽析出后很難去除增產,因此正確的使用緩沖鹽對(duì)延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命非常重要,具體方法如下:
☆使用前過(guò)渡重要的作用。使用后沖洗
○1等度條件:分析前后用過(guò)渡流動(dòng)相沖洗柱體積不少于20-30個(gè)柱體積貢獻,或分析完成后用過(guò)渡流動(dòng)相以0.2ml/min(根據(jù)柱規(guī)格調(diào)整)沖洗過(guò)夜;
○2梯度條件:分析前穩中求進,用與初始流動(dòng)相組成相同的流動(dòng)相以分析流速?zèng)_洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積統籌,分析后,用該過(guò)渡流動(dòng)相沖洗色譜柱不少于20-30個(gè)柱體積協同控製,且梯度盡量平緩單產提升,避免緩沖鹽析出。
*過(guò)渡流動(dòng)相:有機(jī)相和水相的比例和分析流動(dòng)相中兩相比例一致或者水相比例高于分析流動(dòng)相試驗,不含緩沖鹽勞動精神。
○3避免強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱保留:強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,是一個(gè)緩慢的過(guò)程製度保障,一段時(shí)間后會(huì)對(duì)樣品成分產(chǎn)生額外的保留行為預下達,引起峰變寬,拖尾統籌推進,使柱效下降方案,保留時(shí)間變化,到一定程度時(shí)會(huì)導(dǎo)致柱壓升高了解情況,對(duì)許多樣品特別是復(fù)雜樣品很難判斷其是否含有強(qiáng)保留物質(zhì)深入,因此要預(yù)防這一切的方式,堅(jiān)持每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上
清洗方法:
a、未使用緩沖鹽開展研究,每天分析完成后用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上姿勢;
b、使用緩沖鹽首要任務,用上述方法去除緩沖鹽后綠色化,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱20個(gè)柱體積以上;
*注意:不要輕易打開(kāi)柱頭先進的解決方案,因?yàn)橹^一旦打開(kāi)拓展,很難恢復(fù)到新柱的水平,因?yàn)橹^打開(kāi)而造成的檢測(cè)后果宣講活動,客戶(hù)自行負(fù)責(zé)。