高效RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)
別名：蛋白提取試劑盒
英文名稱：RIPA buffer(high)
規(guī)格：20ml ; 100ml ; 500ml
外觀（性狀）：黃色澄清液體
儲存條件：附件PMSF-20℃帶動擴大，裂解液4℃。有效期1年
單位：瓶

運(yùn)輸溫度：常溫運(yùn)輸

       本品為高效RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)開拓創新。主要用于從動物組織和動物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白持續發展。組織活細(xì)胞本產(chǎn)品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml），PMSF請于-20℃保存綜合運用。

使用說明

      如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀供給，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

      根據(jù)使用量實事求是，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF進行探討，使PMSF的最終濃度為1mM》账?；靹騻溆?（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）最新。

       1、樣品前處理：

a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液處理方法，用 PBS重要作用、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液習慣。用槍吹打數(shù)下充足，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞的積極性，用手指把細(xì)胞用力彈散綠色化發展。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞不久前。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀用上了。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管能力建設，然后再裂解關註。

c)對于組織樣品： 把組織剪切成細(xì)小的碎片研究進展。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液連日來，如果需要高濃度的蛋白樣品快速融入，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。

用玻璃勻漿器勻漿提單產，直至充分裂解深入實施。

       2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘發展空間，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE有所應、Western和免疫沉淀等操作足了準備。

高效RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)注意事項(xiàng) ：

       本試劑為強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白著力提升，但在提取核蛋白的同時深刻內涵，也會將基因組一并釋放出來，造成細(xì)胞裂解液粘稠融合，此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液深入闡釋，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳完成的事情；若想測定濃度物聯與互聯，可入加少量 SDS（1%），煮沸后離心測濃度改造層面。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑供給，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度經驗分享。

       如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白解決方案，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)有力扭轉。