掃描電鏡在觀察生物樣品時規定,具有以下特點:多角度觀察樣品的表面結(jié)構(gòu);不需要將樣品切成薄片空間載體;景深大、圖像立體感強(qiáng)相對簡便;放大倍數(shù)從幾十倍到幾十萬倍連續(xù)可調(diào)重要組成部分;在觀察形貌的同時可以對微區(qū)的成分進(jìn)行定量和定性分析流程。而能否獲得真實、清晰勃勃生機、理想的掃描電鏡觀察結(jié)果助力各業,樣品的制備過程是關(guān)鍵。
生物樣品含水直接觀察提供有力支撐,會對掃描電鏡造成以下影響:
1. 樣品蒸發(fā)的水蒸氣遭遇高能電子束應用,會被電離而放電,引起束流大幅度波動品率,使圖像模糊相貫通,或者根本不能成像;
2. 大多數(shù)含水樣品在高真空中容易發(fā)生形態(tài)損傷,表面皺縮積極影響、變形;
3. 樣品揮發(fā)會造成鏡頭自動化方案、光闌等的污染;
4. 燈絲會被上升水蒸氣氧化而變質(zhì)。
生物樣品的含水量高越來越重要,二次電子產(chǎn)率低效率,導(dǎo)電性差,對熱近年來,電子束敏感講道理,僅有少數(shù)樣品如毛發(fā)、牙齒以及含水量極低的昆蟲等可以直接噴鍍觀察技術先進,絕大多數(shù)的生物樣品均要求經(jīng)過干燥處理才能鍍金觀察更多的合作機會。
干燥是掃描電鏡生物樣品制備中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),如果處理不好情況正常,會直接影響到觀察的清晰度與準(zhǔn)確度行業分類。要想制備出好的掃描電鏡生物樣品,需要在干燥過程中盡可能減少由于水分蒸發(fā)而引起的樣品表面形貌的形變提高鍛煉,且必須確保干燥*發展邏輯。大多數(shù)動植物容易發(fā)生明顯的塌陷和變形。因此有所提升,需要針對不同的生物樣品來選擇合適的干燥方法聽得進。
掃描電鏡生物樣品制備常用干燥方法
1. 自然干燥法
自然干燥法是指樣品中的水分在大氣中自然蒸發(fā),或樣品經(jīng)脫水處理后脫水劑自然揮發(fā)而干燥的方法先進水平。
對干種子便利性、果殼、某些干花粉重要平臺、昆蟲標(biāo)本等來說深刻認識,自然干燥法是一個簡易實用有效的方法,雖然在自然干燥過程中,樣品體積有所收縮主動性,但卻保留了樣品的基本形態(tài)創造性。適用于外表堅硬的樣品,如外表有殼的昆蟲道路,木材等規模設備。
自然風(fēng)干——飛納電鏡直接觀察螨蟲
2. 烘干干燥法
烘干干燥法是將要研究的樣品用烘干箱烘干,一般溫度控制在 80℃ 以下指導,烘干程度以含水量在 5% 以下為好競爭力。此方法的干燥速度較快,但水分蒸發(fā)時可能造成樣品變形或斷裂進一步完善。適用于不易變形且耐熱的樣品集聚,比如淀粉粒、孢子粉等堅定不移。
烘干的花粉噴金后直接可以用二次電子觀察
3. 臨界點干燥法
臨界點干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)下組合運用,液體和氣體的密度相等,氣液界面*消失迎難而上,液體的表面張力系數(shù)為零積極。臨界點干燥法之所以一直被視為制作生物醫(yī)學(xué)掃描樣品可靠的干燥方法,是因為此法能消除液體表面張力的作用堅持先行,干燥出的樣品能zui大程度地保存其自然形態(tài)產業。
4. 冷凍干燥法
冷凍干燥法是將含水樣品放入低溫環(huán)境中冷凍,或使用溶劑將樣品中的水逐級替換后冷凍情況較常見,然后抽真空升華可持續。它是利用低溫和真空,使樣品中的水分或溶劑直接升華體製,以達(dá)到干燥樣品的目的構建。冷凍干燥過程不經(jīng)過液相階段,因而避免了氣相和液相之間表面張力對樣品的損傷服務延伸。
5. 真空干燥法
真空干燥法指的是將經(jīng)脫水(多用梯度脫水)的樣品置于真空容器中進(jìn)行干燥的方法共創輝煌。真空干燥法選用高熔點的有機(jī)溶劑(叔丁醇、乙腈進一步、六甲基二硅胺烷大部分、正丁醇等)作升華介質(zhì),既保留了冷凍干燥法的優(yōu)點實際需求,又不用對樣品進(jìn)行冷凍處理解決方案,無冷凍損傷,且操作簡單善謀新篇。適用于所有生物樣品增產,特別是細(xì)菌便利性、細(xì)胞等微小樣品。
經(jīng)過梯度脫水真空干燥的桿菌可以輕松獲得高倍圖像
小結(jié)
干燥方法在不斷改進(jìn)行動力,但還是只能把由干燥引起的樣品變形控制在一定的范圍內(nèi)規模最大。上述 5 種干燥方法各有優(yōu)缺點,且各有適用的生物樣品種類統籌。我們在選擇生物樣品干燥的方法時,盡量選擇能保持樣品表面真實結(jié)構(gòu)的方法協同控製,在保證掃描電鏡狀態(tài)下振奮起來,盡量還原樣品表面細(xì)節(jié)。
對于生物樣品試驗,飛納電鏡低真空模式可以直接觀察一些生物樣品勞動精神,如新鮮植物葉片,昆蟲等製度保障。觀察葉子氣孔預下達,高亮度的 CeB6 燈絲可以在低曝光時間下快速拍照,獲得高質(zhì)量圖像統籌推進,避免了長時間曝光導(dǎo)致氣孔關(guān)閉以及長時間抽真空導(dǎo)致葉片失水收縮方案。
飛納電鏡低真空下觀察葉子氣孔
此外,飛納電鏡的控溫樣品杯可以控制樣品溫度了解情況,進(jìn)而改變樣品周圍的濕度深入,大限度地降低電子束和真空度對樣品的損壞。適用于一些含水較高的水凝膠重要的,蛋白開展研究,藻類等樣品,在冷凍狀態(tài)下相互融合,不脫水首要任務,背散射直接觀察,可以保持樣品的原始形貌結(jié)構(gòu)不同需求。
冷凍的水凝膠發展,觀察到其大范圍內(nèi),短程有序創造更多,長程無序
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