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高速逆流色譜儀的原理和基本配置

   2020年01月14日 14:26  
  【儀器網(wǎng) 使用手冊】高速逆流色譜法 (High-speed Countercurrent Chromatography範圍,簡稱HSCCC),于1982年由美國國立衛(wèi)生院Ito博士研制開發(fā)的一種新型的紮實做、連續(xù)gao效的液分配色譜技術(shù)空間廣闊,與其它色譜技術(shù)不同的是它不需任何固態(tài)載體,因此能避免固相載體表面與樣品發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致樣品的污染提供深度撮合服務、失活服務品質、變性和不可逆吸附等不良影響。同時(shí)它也具有適用范圍廣組成部分、快速影響、進(jìn)樣量大、費(fèi)用低的過程中、回收率高等優(yōu)點(diǎn)發展契機。因此,己在生物促進進步、醫(yī)藥發力、食品、材料迎來新的篇章、化妝品和環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用共創美好,尤其是在天然產(chǎn)物活性成分的分離純化領(lǐng)域倍受重視推動並實現。
 
  1.高速逆流色譜技術(shù)的原理
 
  高速逆流色譜法是建立在單向性流體動力平衡體系之上的一種逆流色譜分離方法,它是在研究旋轉(zhuǎn)管的流體動力平衡時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)的覆蓋範圍。當(dāng)螺旋管在慢速轉(zhuǎn)動時(shí)優化程度,螺旋管中的兩相都從一端分布到另一端。用某一相作移動相從一端向另一端洗脫時(shí)實踐者,另一相在螺旋管里的保留值大約50%取得明顯成效,但這一保留量會隨著移動相流速的增大而減小,使分離效率降低數據。但使螺旋管的轉(zhuǎn)速加快時(shí)創新的技術,兩相的分布發(fā)生變化。當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到臨界范圍時(shí)顯著,兩相便會沿螺旋管長度*分開快速增長,其中一相全部占據(jù)首端的一段,我們稱這一相為首端相占,另一段全部占據(jù)尾端的一段初步建立,稱為尾端相。高速逆流色譜正是利用了兩相的這種單向性分布特征供給,在高的螺旋管轉(zhuǎn)動速下的方法,如果從尾端送入首端相,它將穿過尾端相而移向首端進行探討,同樣落到實處,如果從首端相送入尾相,它將穿過首端相而移向螺旋管的尾端最新。分離時(shí)技術創新,在螺旋管內(nèi)首先注入其中的一相(固定相),然后從合適的一端泵入移動相重要作用,讓它載著樣品在螺旋管中無限次的分配持續向好。儀器轉(zhuǎn)速越快,固定相保留越多充足,分離效果越好進展情況,且大大地提高了分離速度,故稱高速逆流色譜綠色化發展。
 
  2.高速逆流色譜色譜儀的基本配置
 
  儀器的中心部分:(a) ITO多層線圈分離柱應用的選擇,它是由100-200米長、內(nèi)徑為1.6mm左右的聚四氟乙烯管沿具有適當(dāng)內(nèi)徑的內(nèi)軸共繞十多層而成左右,其管內(nèi)總體積可達(dá)300mL左右背景下。(b)平衡器,它可以調(diào)節(jié)重量,它的作用是讓(a)自然條件, (b)相對于中心軸兩邊重量平衡設計標準。當(dāng)在旋轉(zhuǎn)控制器的控制下,在齒輪傳動裝置作用下互動互補,(a)發揮重要帶動作用,(b)同時(shí)繞中心軸作順時(shí)針或反時(shí)針的行星運(yùn)動,即(a)- (b)本身既在自轉(zhuǎn)意料之外,但同時(shí)又在繞中心軸公轉(zhuǎn)文化價值,公轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速可從0-4000r/min。從線圈分離柱中通過中空的中心軸還同時(shí)牽引出了線圈的兩端置之不顧,一端供泵入液用不斷完善,一端輸出液體。儀器工作需要互不相溶的兩種液體合作關系,一相作固定相著力提升,一相作移動相。儀器工作前傳遞,先將作為固定相一相的液體通過恒流泵壓入線圈分離柱融合,然后用進(jìn)樣器將待分離的樣品按如圖所示進(jìn)樣,zui后用恒流泵壓入移動相相關性,同時(shí)啟動中心部分運(yùn)轉(zhuǎn)直到轉(zhuǎn)速大于600r/min完成的事情。此時(shí),兩相在線圈分離柱中具有相對運(yùn)動之勢穩定。由于移動相*的壓入改造層面,阻止了固定相的流出,同時(shí)效高化,移動相帶著樣品在線圈分離柱中進(jìn)行無限次的分配而使復(fù)雜樣品得到分離。當(dāng)移動相經(jīng)過檢測器時(shí)投入力度,由于不同的樣品組分會產(chǎn)生不同大小的信號創造,用記錄儀便能得到逆流色譜圖譜,同時(shí)用餾分收集器分步收集移動相便會得到復(fù)雜樣品被分開的組分貢獻法治。較大的制備型HSCCC設備製造,柱容積可達(dá)530m1,一次zui多進(jìn)樣可達(dá)20g粗品;較小的分析型的HSCCC柱容積為8m1攻堅克難,進(jìn)樣量為幾十微克管理,zui大轉(zhuǎn)速可達(dá)4000r/min,分析能力堪與HPLC相媲美雙向互動。
 
  在常用的HSCCC基礎(chǔ)上效率和安,有人提出雙向模式的高速逆流色譜" (dua-mode counter crurrent chromatography簡稱Dccc),即前一次的流動相作下一次的固定相,洗脫方向相反深入開展。與常規(guī)的HSCCC相比更為一致,Dccc可以降低制備時(shí)間,免去柱沖洗時(shí)間技術的開發,提高分離效率研究與應用,不必預(yù)測溶質(zhì)的保留時(shí)間和分配系數(shù),減少了溶劑選擇的繁瑣更高效。但目前由于溶劑體系系統(tǒng)不完善全面協議,應(yīng)用范圍較窄。

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