移動(dòng)端
直播推薦
回放
回放
企業(yè)動(dòng)態(tài)
- 領(lǐng)拓聚焦 | 電子樣品顯微切片與無損檢測技術(shù)研討會(huì)
- 領(lǐng)拓聚焦 | 中山汽車材料及零部件先進(jìn)檢測應(yīng)用技術(shù)交流會(huì)
- 成都市機(jī)械工程學(xué)會(huì)材料與熱處理分會(huì)會(huì)員大會(huì)
- 強(qiáng)勢(shì)來襲的發生！STELLARIS，重新定義共聚焦
- 領(lǐng)拓聚焦 | 第十三屆全國大學(xué)生金相大賽選拔賽（四川大學(xué)）
- 領(lǐng)拓聚焦 | 全國大學(xué)生金相技能大賽正在火熱進(jìn)行中
- 領(lǐng)拓聚焦 | 第十三屆全國大學(xué)生金相技能大賽選拔賽(省賽)
- 領(lǐng)拓聚焦 | 前沿金相/電鏡制樣技術(shù)與顯微觀察學(xué)術(shù)研討會(huì)
推薦展會(huì)
賽默飛色譜質(zhì)譜亮相生物技術(shù)藥物質(zhì)量分析研討會(huì)
生物醫(yī)藥行業(yè)的技術(shù)盛會(huì)
7月17-19日像一棵樹，由中國藥學(xué)會(huì)主辦的“第七屆中國藥學(xué)會(huì)生物技術(shù)藥物質(zhì)量分析研討會(huì)”盛大召開過程中，來自生物醫(yī)藥及科研領(lǐng)域的多位專家及現(xiàn)場近300位行業(yè)人士相聚夏日炎炎的北京，共同探討生物醫(yī)藥行業(yè)內(nèi)的研究進(jìn)展及前沿技術(shù)全面協議。
賽默飛色譜質(zhì)譜生物制藥業(yè)務(wù)發(fā)展經(jīng)理唐愷帶來《基于高分辨質(zhì)譜平臺(tái)的宿主細(xì)胞殘留蛋白(HCPs)檢測》的解決方案重要部署，助力生物醫(yī)藥行業(yè)解決HCPs分析難題。
賽默飛色譜質(zhì)譜生物制藥業(yè)務(wù)發(fā)展經(jīng)理唐愷
什么是HCPs工具？為什么需要關(guān)注HCPs智慧與合力？
重組蛋白類藥物是由遺傳修飾的原核或真核宿主細(xì)胞培養(yǎng)/發(fā)酵產(chǎn)生，由于細(xì)胞凋亡/死亡/裂解重要的角色，其他非必需蛋白質(zhì)也可能釋放到細(xì)胞培養(yǎng)基/發(fā)酵液中開放要求，因此殘留在終產(chǎn)品中的其他蛋白質(zhì)即為宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCPs）。
HCPs的存在會(huì)影響藥物的安全性和有效性平臺建設，以及具有蛋白水解活性的HCPs影響藥物產(chǎn)品的穩(wěn)定性服務機製，因此生物醫(yī)藥公司不斷優(yōu)化其純化工藝，從而控制終產(chǎn)品中HCPs的種類和含量使用。
現(xiàn)有分析方法有哪些不足大幅拓展？
目前ELISA方法因其高靈敏度、高通量和易操作優(yōu)勢(shì)成為工業(yè)界的金標(biāo)準(zhǔn)更加堅強，但仍存在很多限制與時俱進。包括：
1.不能對(duì)HCPs進(jìn)行鑒定，低豐度HCPs的檢測易受限于高豐度蛋白的干擾初步建立；
2.定量動(dòng)態(tài)范圍(3個(gè)數(shù)量級(jí))較低綜合運用，抗體受限，開發(fā)周期長的方法；
3.無法改變已有的方法實事求是，缺少校正標(biāo)準(zhǔn)限制定量的準(zhǔn)確性，因此需多種檢測方法相結(jié)合落到實處。
高分辨質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢(shì)
隨著高分辨質(zhì)譜技術(shù)性能的不斷提升服務水平，已具有高靈敏度和寬的定量動(dòng)態(tài)范圍，以及蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展技術創新，可實(shí)現(xiàn)對(duì)未知蛋白質(zhì)的高通量定性和定量應用擴展。
Thermo Scientific™ Q Exactive™ Plus
組合型四極桿Orbitrap質(zhì)譜儀
基于nanoLC-MS/MS高靈敏平臺(tái)的方法，如何對(duì)HCPs進(jìn)行準(zhǔn)確定性和相對(duì)定量呢增多？
一活動上、樣品前處理
2017年禮來制藥公司Huang, Lihua, et al.在Analytical Chemistry雜志上發(fā)表中的方法是新格局，以NIST抗體標(biāo)準(zhǔn)品為例，在蛋白質(zhì)非變性的條件下進(jìn)行酶切安全鏈，抗體主成分被部分酶切顯示，酶切后經(jīng)90度高溫變性，未被酶切的部分將被沉淀去除真正做到，從而提高HCPs的鑒定幾率和方法的動(dòng)態(tài)范圍科普活動。
我們?cè)诖嘶A(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化，縮短前處理時(shí)間提高工作效率強化意識，同時(shí)為考察此套流程對(duì)1-100ppm的HCPs的鑒定和相對(duì)定量能力長期間，加入內(nèi)標(biāo)蛋白UPS2(48種蛋白，6個(gè)不同濃度)進(jìn)行定性和相對(duì)定量現場。
圖1.樣品前處理流程示意圖(來自Huang, Lihua, et al.)
二高端化、儀器、色譜柱我有所應、數(shù)據(jù)分析軟件
目前根據(jù)液相色譜的流速可分為納升液相色譜(nanoLC,<1µL/min)提單產、毛細(xì)管液相色譜(capillaryLC,1-1µL/min)、微流速液相色譜(microLC,10-100µL/min)至關重要、分析流速液相色譜(LC,>100µL/min)發展空間，由于樣品單位濃度和離子化效率依次下降，因此其靈敏度逐漸下降有所應，本次實(shí)驗(yàn)采用靈敏度zui高的納升液相系統(tǒng)足了準備。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.定性結(jié)果：
內(nèi)標(biāo)蛋白UPS2中含有48種內(nèi)標(biāo)蛋白6個(gè)不同濃度著力提升，共鑒定其中24種系統，其實(shí)際含量結(jié)果如表1，含量范圍為0.05-444.88ppm重要意義，實(shí)際含量>1ng(10ppm)的16種內(nèi)標(biāo)蛋白全部鑒定到，實(shí)際含量在0.06-0.38ng(0.6-3.8ppm)范圍內(nèi)共鑒定到6種更加廣闊，此方案的靈敏度足以滿足生物藥領(lǐng)域客戶的需求規劃。
表1.本次實(shí)驗(yàn)中鑒定到UPS2內(nèi)標(biāo)蛋白的種類及其實(shí)際含量
2.蛋白相對(duì)定量結(jié)果：
本次實(shí)驗(yàn)進(jìn)行HCPs的相對(duì)定量，采用蛋白TOP3的特異性肽段峰面積的平均值算法可以使用，得出每種蛋白的峰面積進入當下，經(jīng)過三次技術(shù)重復(fù)，對(duì)特異性肽段大于等于1的蛋白峰面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)效高化，平均峰面積分布如圖3A新體系，峰面積大于1e?的蛋白為此樣品的主抗體，可看出本實(shí)驗(yàn)定量范圍達(dá)6個(gè)數(shù)量級(jí)最為顯著。UPS2內(nèi)標(biāo)蛋白的峰面積與絕dui含量的分布如圖3B尤為突出，峰面積與絕dui含量存在一定的線性關(guān)系規定， HCPs的相對(duì)含量可根據(jù)其峰面積進(jìn)行初步判斷，進(jìn)而優(yōu)化純化工藝空間載體。
圖3A.特異性肽段大于等于1的蛋白峰面積分布圖
圖3B.內(nèi)標(biāo)蛋白UPS2的峰面積(log2)與其絕dui含量的分布
基于UHPLC-MS/MS平臺(tái)的方法：
UHPLC-MS/MS對(duì)于低含量HCPs的檢測時(shí)高質量，需提高上樣量(至少是納升液相系統(tǒng)的50倍)以提高其靈敏度。
經(jīng)實(shí)例驗(yàn)證此方法同樣滿足當(dāng)前大部分需求重要組成部分，某抗體藥物的HCPs經(jīng)ELISA定量為5ppm流程，UHPLC-MS/MS能夠準(zhǔn)確鑒定到6種HCPs(unique peptides≥2),通過內(nèi)標(biāo)UPS2確定其檢測限達(dá)1ppm，6種HCPs的相對(duì)含量在1-10ppm內(nèi)勃勃生機。
小結(jié)
隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的飛速發(fā)展助力各業，賽默飛Orbitrap高分辨質(zhì)譜，可采用納升液相提供有力支撐，超液相兩種方式應用，定性和相對(duì)定量分析HCPs，LOD均低至1ppm以下加強宣傳，為傳統(tǒng)的ELISA方法補(bǔ)充更為豐富的信息臺上與臺下，進(jìn)一步幫助生物醫(yī)藥企業(yè)優(yōu)化純化工藝，監(jiān)控終產(chǎn)品和過程產(chǎn)物中的HCPs含量技術發展。
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：儀器網(wǎng)”的所有作品集聚效應，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載重要手段、摘編或利用其它方式使用上述作品互動講。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用像一棵樹，并注明“來源：儀器網(wǎng)”過程中。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任能運用。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非儀器網(wǎng)）的作品達到，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)不可缺少，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任蓬勃發展。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)提高鍛煉，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源發展邏輯，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容有所提升、版權(quán)等問題聽得進，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利先進水平。
浙公網(wǎng)安備 33010602002722號(hào)
2025第十屆華南空氣壓縮機(jī)展覽會(huì)
展會(huì)城市：佛山市展會(huì)時(shí)間：2025-05-21