【儀器網(wǎng) 使用手冊】接下來小編為大家介紹下流式細胞儀的調(diào)試和使用
簡介
古語說:“工欲善其事,必先利其器”競爭力。要想很好地應(yīng)用流式細胞分析和分選技術(shù)充分,必需先對儀器進行調(diào)試,使其處于良好的工作狀態(tài)集聚,并能正確使用儀器競爭力。下面簡要介紹細胞計的調(diào)試項目及要點、使用的程序等等狀況。
調(diào)試和校準
流式細胞儀在使用前機製性梗阻,甚至在使用過程中都要精心進行調(diào)試,以保證工作的可靠性和*性全過程。調(diào)試的項目主要是激光強度集成應用、液流速度和測量區(qū)的光路等。
激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外不負眾望,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為zui大高效流通。
液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度精準調控。
測量區(qū)光路調(diào)節(jié)∮行?。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵體製。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束創新科技、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交服務延伸,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成具有重要意義。
流式細胞術(shù)中所測得的量是相對值進一步,因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得jue對的意義強大的功能。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調(diào)整和定量標度實際需求。標準樣品應(yīng)該穩(wěn)定,有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形優勢,樣品分散性能良好善謀新篇,且經(jīng)濟、容易獲得便利性。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品方法,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作提供有力支撐,或標有熒光素切實把製度,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4)自行開發,經(jīng)PBS清洗3次進行部署,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h應用情況,zui后經(jīng)PBS再清洗保護好,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經(jīng)熒光染色表現,所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光系列。
儀器的操作和使用
①打開電源相互配合,對系統(tǒng)進行預熱慢體驗;
②打開氣體閾智能化,調(diào)節(jié) 壓力科技實力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統(tǒng)建設;
≈匾?、墼跇悠饭苤屑尤肴ルx子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);
∠嗷ト诤?、芾眯蕵藴蕵悠肥滓蝿?,調(diào)整儀器,使在激光功率不同需求、光電倍增管電壓發展、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0和90散射的熒光強度zui強總之,并要求變異系數(shù)為zui忻嫦?。?br />
⊙袑W體驗、葸x定流速建設項目、測量細胞數(shù)、測量參數(shù)等落實落細,在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品相結合;同時選擇計算機屏上數(shù)據(jù)的顯示方式,從而能直觀掌握測量進程製高點項目;
楫a業發展、迾悠窚y量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統(tǒng)認為;
》蘸?、咭驗閷嶒灁?shù)據(jù)已存入計算機硬盤(有的機器還備有光盤系統(tǒng)新趨勢,存貯量更大)反應能力,因此可關(guān)閉氣體、測量裝置學習,而單獨使用計算機進行數(shù)據(jù)處理結構重塑;
⑧將所需結(jié)果打印出來應用優勢。
操作和使用中的注意事項
1)光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件高質量發展,暴露的較強的光線下以后,需要較長時間的“暗適應(yīng)”以消除或降低部分暗電流本底才能工作高效節能;另外還要注意磁屏蔽影響力範圍;
2)光源不得在短時間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開;使用光源必須預熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常培訓;
3)液流系統(tǒng)必需隨時保持液流暢通不合理波動,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要經(jīng)過過濾重要工具、消毒積極拓展新的領域;
4)注意根據(jù)測量對象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等;
5)特別強調(diào)每次測量都需要對照組相對開放。
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