移動(dòng)端
直播推薦
回放
回放
企業(yè)動(dòng)態(tài)
- 華測(cè)儀器表面電位衰減測(cè)試系統(tǒng)-新品上市
- 東方中科再次攜手華測(cè)儀器，購(gòu)入高阻高壓表重要意義！
- 利用氙燈老化試驗(yàn)箱模擬自然環(huán)境
- 非常感謝青木家居用品(珠海)有限公司購(gòu)買我司多臺(tái)實(shí)驗(yàn)設(shè)備
- 感謝北京東信力搏科技有限公司購(gòu)買我司UV紫外線老化試驗(yàn)箱
- 熱烈慶賀柳沁科技紫外線老化試驗(yàn)箱簽約東莞市雙嘉新材料有限公司
- 慶祝無錫電梯科技有限公司購(gòu)買鹽霧試驗(yàn)機(jī)
- 感謝上海騰液液壓機(jī)設(shè)備有限公司購(gòu)買我司大型步入式高低溫試驗(yàn)箱
推薦展會(huì)
【中國(guó)儀器網(wǎng) 解決方案】質(zhì)譜技術(shù)在蛋白鑒定等實(shí)驗(yàn)中具有不可忽視的作用生產製造，不過，目前的應(yīng)用還不是特別廣泛攜手共進。那么是目前主流，有問題了怎么解決呢?本文收集了相關(guān)的新手對(duì)于這項(xiàng)技術(shù)的常見問題與解決方法。希望能更好地幫助大家了解這項(xiàng)技術(shù)高質量。
問題1. 一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜有什么區(qū)別?什么時(shí)候做一級(jí)應用創新，什么時(shí)候做二級(jí)?
答：一級(jí)質(zhì)譜鑒定的方式主要指胎指紋圖譜(PMF)，即利用質(zhì)譜儀測(cè)量酶解片段的分子量并搜庫(kù)比較實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì) 的鑒定機構，二級(jí)質(zhì)譜是在一級(jí)質(zhì)譜的基礎(chǔ)上再選擇部分肽段做進(jìn)一步的破碎并對(duì)碎片進(jìn)行深入分析和比較的特性，鑒定出該肽段的序列并結(jié)合PMF的結(jié)果從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定。二級(jí)質(zhì)譜能夠得到部分肽短的序列基礎，具有更高的可靠性提供堅實支撐。隨著現(xiàn)在雜志對(duì)數(shù)據(jù)的要求越來越嚴(yán)格，二級(jí)質(zhì)譜鑒定是蛋白鑒定的大趨勢(shì)高產，而且即使目前做一級(jí)質(zhì)譜鑒定的結(jié)果信息化技術，也需要挑選部分PMF結(jié)果做二級(jí)質(zhì)譜驗(yàn)證。
問題2. 研究的物種不是模式生物 怎么辦?
答：可以參考親緣關(guān)系近的模式生物做比對(duì)而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的成功鑒定良好，如果質(zhì)譜圖很好而沒有鑒定結(jié)果說明這是一個(gè)全新的蛋白逐步顯現，可以采用de-novo等技術(shù)做深入分析與鑒定銘記囑托。
問題3. 該如何評(píng)價(jià)質(zhì)譜效果的好壞?
答：做PMF一般得分超過60分(P<0.05)就算成功鑒定，而串聯(lián)質(zhì)譜自動化裝置，得分超過60分或者雖然沒有超過60分示範，但是有少一條肽段的得分超過30分就算成功鑒定。
問題4. 一些特殊的質(zhì)譜方法有什么用途?
答：質(zhì)譜的其它用途包括磷酸化位點(diǎn)分析有很大提升空間、蛋白測(cè)序運行好、混合蛋白鑒定(shotgun技術(shù))以及分子量測(cè)定、二硫鍵位置分析等等可能性更大。
問題5. 用什么染色方法比較好?
答：用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行染色部署安排，銀染也可以，但鑒定成功率稍低技術，并且推薦用串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)銀染蛋白進(jìn)行鑒定可以大大提高鑒定成功率推廣開來。
問題6. 凝膠是否可以長(zhǎng)期保存?該如何保持?對(duì)鑒定效果有影響嗎?
答：如果保存時(shí)間超過一個(gè)月，可以用保鮮膜包裹后放入冰箱保持相對較高，如果小于一個(gè)月資源配置，則可以常溫保持，不會(huì)影響質(zhì)譜鑒定效果姿勢。
問題7. 質(zhì)譜鑒定取膠點(diǎn)該如何取?有什么注意事項(xiàng)?
答：取點(diǎn)的時(shí)候?qū)?.2ml的槍頭前端剪去一點(diǎn)相互融合，用槍頭將凝膠戳取下來并轉(zhuǎn)移至0.5ml離心管中，用水將膠粒反復(fù)吸打沖洗兩至三次交流研討，后吸干離心管中所有水分封蓋保存更加完善。離心管用進(jìn)口離心管，以免塑料污染;水用去離子水或者雙蒸水;取點(diǎn)的時(shí)候帶好口罩與手套建設應用，以免角蛋白污染支撐作用。
問題8. 凝膠是否可以長(zhǎng)期保存?該如何保存?如何運(yùn)送?
答：蛋白凝膠可以長(zhǎng)期保存而不影響質(zhì)譜鑒定效果，一般而言動力，如果在一兩個(gè)星期以內(nèi)同時，用保鮮膜包好，放到4度冰箱保存效高性，如果保存時(shí)間超過一個(gè)月模式，可以把蛋白點(diǎn)取下后放入-20度或者-80度冰箱，不會(huì)影響后續(xù)質(zhì)譜鑒定效果提升。運(yùn)送膠點(diǎn)的時(shí)候采用常溫運(yùn)送即可高品質，三五天內(nèi)都不會(huì)有太大的影響。
問題9. 質(zhì)譜鑒定取膠點(diǎn)該如何取?有什么注意事項(xiàng)?
答：取點(diǎn)的時(shí)候?qū)?.2ml的槍頭前端剪去一點(diǎn)支撐能力，用槍頭將凝膠戳取下來并轉(zhuǎn)移至0.5ml離心管中資源優勢，用水將膠粒反復(fù)吸打沖洗兩至三次，后吸干離心管中所有水分封蓋保存并做好標(biāo)記特征更加明顯。離心管用進(jìn)口離心管估算，以免塑料污染;水用去離子水或者雙蒸水;取點(diǎn)的時(shí)候帶好口罩與手套講理論，以免角蛋白污染。
問題10. 一級(jí)質(zhì)譜與二級(jí)質(zhì)譜該如何選擇?
答：一級(jí)質(zhì)譜的鑒定方法又常稱為肽指紋圖譜鑒定(peptide-mass mapping不要畏懼，PMF)服務為一體，二級(jí)質(zhì)譜的鑒定方法又常稱為串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。早期蛋白鑒定大大縮短，因?yàn)榭紤]鑒定成本的問題要落實好，一般做測(cè)序生物的蛋白鑒定可以選擇一級(jí)質(zhì)譜緊密相關，而非測(cè)序生物常選擇二級(jí)質(zhì)譜「趿?，F(xiàn)在，二級(jí)質(zhì)譜的價(jià)格也大大降低培訓，和一級(jí)質(zhì)譜并無太大差異不合理波動，而且可靠性和鑒定成功率都大大提高，本公司一般都推薦客戶(不管是研究測(cè)序生物還是非測(cè)序生物)直接做串聯(lián)質(zhì)譜重要工具，而不考慮進(jìn)行肽指紋圖譜鑒定積極拓展新的領域。
問題11. 質(zhì)譜鑒定大致是什么流程，公司一般都提供那些數(shù)據(jù)?
質(zhì)譜鑒定主要包括蛋白酶解非常激烈、質(zhì)譜數(shù)據(jù)獲取競爭力所在、對(duì)庫(kù)檢索三個(gè)步驟。針對(duì)每一個(gè)蛋白點(diǎn)的鑒定領域，一般會(huì)提供三種數(shù)據(jù)溝通機製，具體包括：質(zhì)譜圖(PDF格式，包括1張一級(jí)質(zhì)譜圖和5-10張二級(jí)質(zhì)譜圖)註入新的動力、質(zhì)譜峰列表(text格式領先水平，主要是一些質(zhì)譜碎片的信息)、檢索結(jié)果(自己建庫(kù)進(jìn)行本地化檢索的一般提供的PDF格式或者excel格式雙重提升，如果是Mascot在線檢索的一般提供網(wǎng)頁格式)戰略布局。
問題12. 質(zhì)譜鑒定會(huì)不成功一般有哪些因素?
答：質(zhì)譜鑒定不成功主要可以分為兩類，一類是質(zhì)譜效果不好表現明顯更佳，一類是沒有可參考的蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)狀態，質(zhì)譜效果不好的原因又可以細(xì)分為蛋白點(diǎn)太淡以至于蛋白含量過低、蛋白點(diǎn)取得太小不利于操作指導、雖然經(jīng)過雙向電泳分離但卻是某幾個(gè)蛋白的混合蛋白點(diǎn)廣泛認同、蛋白酶解及質(zhì)譜操作失誤等，要避免這些因素需要盡量取顏色深一些的蛋白點(diǎn)增持能力，并且取的蛋白點(diǎn)面積需要適當(dāng)大一些(對(duì)于某些很小但很清晰的蛋白點(diǎn)共同努力，取點(diǎn)的時(shí)候可是適當(dāng)選擇孔徑大一些的槍頭，把邊上空白處適當(dāng)取到一些也不要緊)追求卓越，避免取點(diǎn)可能混合的蛋白點(diǎn)逐漸完善，具備豐富的酶解質(zhì)譜操作經(jīng)驗(yàn)參與能力。而由于沒有可參考的數(shù)據(jù)庫(kù)導(dǎo)致的鑒定效果較差，可以通過更換范圍更大的數(shù)據(jù)庫(kù)是目前主流、采用EST數(shù)據(jù)庫(kù)以及根據(jù)單個(gè)物種的蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建本地質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的方式得到解決充分發揮。
問題13. 串聯(lián)質(zhì)譜鑒定和質(zhì)譜測(cè)序有什么區(qū)別?
質(zhì)譜鑒定往往采用軟件對(duì)已有數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行自動(dòng)檢索匹配得到結(jié)果，而質(zhì)譜測(cè)序則需要根據(jù)質(zhì)譜峰圖中相鄰或者相近峰的分子量差異直接推算出肽段的序列充分發揮。
問題14. 未知蛋白質(zhì)是通過質(zhì)譜還是蛋白質(zhì)測(cè)序儀來測(cè)序的呢?
現(xiàn)在比較簡(jiǎn)單的方法是質(zhì)譜法選擇適用，而且測(cè)一個(gè)樣品價(jià)格也不高。具體價(jià)格各個(gè)實(shí)驗(yàn)室不一樣設計，100-500元吧業務指導。如果質(zhì)譜法不能確定的話還可以結(jié)合N端測(cè)序，可測(cè)10幾個(gè)氨基酸就此掀開。兩個(gè)數(shù)據(jù)結(jié)合分析基本可以確定目的蛋白了積極性，現(xiàn)在的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)相當(dāng)強(qiáng)大了。
后不斷豐富，小小地對(duì)以上的內(nèi)容概括一下實施體系，質(zhì)譜用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行染色，蛋白凝膠的保存時(shí)間大于一個(gè)月時(shí)各有優勢，可將蛋白點(diǎn)取下后放在負(fù)二十度或者負(fù)八十度的環(huán)境中效果較好，隨著技術(shù)的發(fā)展，當(dāng)前二級(jí)質(zhì)譜的價(jià)格與一級(jí)質(zhì)譜相比差異不大持續，推薦直接做二級(jí)質(zhì)譜等多個領域。
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品高質量，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載提供了有力支撐、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的前景，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用進一步意見，并注明“來源：儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者共享應用，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任生產能力。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息示範推廣，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)堅持好，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體大幅增加、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)特性，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容建言直達、版權(quán)等問題多種，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利充分發揮。
浙公網(wǎng)安備 33010602002722號(hào)
2025第十屆華南空氣壓縮機(jī)展覽會(huì)
展會(huì)城市：佛山市展會(huì)時(shí)間：2025-05-21