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內(nèi)毒素在細(xì)胞內(nèi)的解毒和清除中的內(nèi)化案例介紹(二)
大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,內(nèi)化反應(yīng)和激活效應(yīng)是分離的示範。最近Beutler等證實(shí)應用前景,具有特異性的抗TLR4多克隆抗體具有擬內(nèi)毒素的活性,從而認(rèn)為LPS 并非必須經(jīng)過內(nèi)化才可誘發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)運行好。Kitchens等證實(shí)首次,mCD14介導(dǎo)的LPS內(nèi)化的動(dòng)力學(xué)主要受LPS聚集體大小的影響,而與各種細(xì)胞對(duì)LPS的不同反應(yīng)無(wú)關(guān)部署安排。
LPS內(nèi)化到中性粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞中后可以經(jīng)過脫鯎u籃;ザ拘裕以?/span>LBP和CD14參與下推廣開來,其內(nèi)化的速度會(huì)大大加快推動。Kitchens等采取配體聚合作用和LPS誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)對(duì)CD14依賴性LPS內(nèi)化動(dòng)力學(xué)的影響進(jìn)行分析。他們?cè)谌梭w單核細(xì)胞THP-1細(xì)胞株和小鼠巨噬細(xì)胞株中進(jìn)行了兩個(gè)彼此獨(dú)立的研究資源配置,證實(shí)LPS 的內(nèi)化初速度和內(nèi)化的程度會(huì)隨LPS聚集體增大而增加開展研究,在LBP參與下,大的LPS聚集體的內(nèi)化速度極其快速相互融合,在1min內(nèi),70%的細(xì)胞結(jié)合LPS發(fā)生內(nèi)化綠色化,而小的LPS聚集體的內(nèi)化速度較大的LPS聚集體和單體LPS明顯減慢不同需求。
在無(wú)LBP存在時(shí),單體LPS與sCD14形成復(fù)合物參與內(nèi)化效應(yīng)保持穩定。小的LPS聚集體與mCD14結(jié)合后內(nèi)化速度很慢總之,在1min內(nèi),與細(xì)胞結(jié)合的LPS為5%支撐作用;相反研學體驗,起初為聚集狀態(tài)對(duì)LPS 的刺激潛能沒有影響或僅存在較小的影響。以前的研究證實(shí)最為突出,LPS 誘導(dǎo)信號(hào)反應(yīng)可能會(huì)影響LPS在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和加工落實落細。
有人證實(shí),C3H/HeN(內(nèi)毒素反應(yīng)正常小鼠品系)和C3H/HeJ(內(nèi)毒素反應(yīng)低下小鼠品系)小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)化類似高效化,說明兩者內(nèi)化不存在差異製高點項目,推-翻了既往認(rèn)為C3H/HeJ小鼠品系的單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)化和攝取LPS有缺陷的結(jié)論。
另外支撐能力,用LPS預(yù)先刺激THP-1后資源優勢,對(duì)LPS的內(nèi)化能力無(wú)任何影響高效利用。LPS 特異性抑制劑LA-14-PP(為脂質(zhì)A的同系物,congener)預(yù)先暴露于巨噬細(xì)胞可以抑制細(xì)胞的激活效應(yīng)估算,但對(duì)內(nèi)化動(dòng)力學(xué)無(wú)任何影響講理論。由此可見,在這些細(xì)胞中不要畏懼,LPS由特定的機(jī)制完成其內(nèi)化反應(yīng)服務為一體,其動(dòng)力學(xué)主要依賴于LPS呈遞到細(xì)胞的物理狀態(tài)。
Kitchens等對(duì)轉(zhuǎn)染CD14 cDNA的THP-1細(xì)胞和正常人類單核細(xì)胞進(jìn)行了LPS內(nèi)化的起始途徑研究大大縮短。他們將這些細(xì)胞暴露到低張性介質(zhì)中要落實好,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的包被小窩結(jié)構(gòu)消失,同時(shí)能夠阻止125Ⅰ標(biāo)記轉(zhuǎn)鐵蛋白的內(nèi)化更默契了。但是隨后的實(shí)驗(yàn)則顯示無(wú)法抑制CD14介導(dǎo)的3H單體LPS和LPS聚集體的內(nèi)化效應(yīng)先進技術。
通過金免疫電子顯微鏡技術(shù)觀察到,結(jié)合CD14的LPS主要存在于非包被結(jié)構(gòu)中不合理波動,這些結(jié)構(gòu)大多數(shù)為小管內(nèi)陷(tubular invaginations)宣講手段、胞內(nèi)小管(intracellular tubules)及液泡(vacuoles)。使用雙色激光共焦點(diǎn)顯微鏡(two-colorlaser confocal microscope)技術(shù)發(fā)現(xiàn)積極拓展新的領域,經(jīng)得克薩斯紅標(biāo)記的LPS和硼聯(lián)吡咯甲烷(borondipyrromethane 配套設備,BODIPY)標(biāo)記的轉(zhuǎn)鐵蛋白內(nèi)化到細(xì)胞內(nèi)的不同位置上,即使延長(zhǎng)細(xì)胞培育時(shí)間也未發(fā)現(xiàn)顏色重疊現(xiàn)象相對開放。
相反推進高水平,在THP-1轉(zhuǎn)化細(xì)胞株上,有LDL受體的跨膜區(qū)片段拓展應用、胞質(zhì)區(qū)片段和CD14的融合蛋白質(zhì)分子表達(dá)生產創效,LPS則大部分結(jié)合到包被小窩結(jié)構(gòu)上,與胞內(nèi)轉(zhuǎn)鐵蛋白共定位在細(xì)胞內(nèi)管理,表現(xiàn)出顏色重疊現(xiàn)象優化上下。依賴CD14的內(nèi)化活動(dòng)主要通過非包被結(jié)構(gòu)以質(zhì)膜內(nèi)陷方式指導(dǎo)LPS進(jìn)入小泡內(nèi),而這種小泡不同于轉(zhuǎn)鐵蛋白內(nèi)化的早期內(nèi)體結(jié)構(gòu)模樣。只有小部分LPS進(jìn)入到包被小窩中生產體系。
說明不同的物質(zhì)狀態(tài)內(nèi)化途徑存在著差異,受體的結(jié)構(gòu)也影響配體內(nèi)化到達(dá)的目的地很重要。LPS形成聚集體會(huì)大大增強(qiáng)其內(nèi)化活動(dòng)技術節能,加速進(jìn)入非網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的途徑。
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第四屆全國(guó)光譜大會(huì)
展會(huì)城市:株洲市展會(huì)時(shí)間:2025-05-08