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超高效液相色譜UPLC使得藥學(xué)工作者可以在更短的時間日漸深入、更高的色譜分離度動力、更少的溶劑消耗下對中藥復(fù)雜樣品進(jìn)行分析測定。UPLC在中藥的化學(xué)成分識別互動式宣講、指紋圖譜及代謝組學(xué)等分析領(lǐng)域逐步得到了應(yīng)用效高性,促進(jìn)了中藥的質(zhì)量評控。
超高效液相色譜UPLC與不同檢測器聯(lián)用在中藥分析中的應(yīng)用
1. UPLC與UV自動化、ELSD聯(lián)用在中藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用
超高效液相色譜UPLC與不同檢測器聯(lián)用提升,可以對含不同化學(xué)類型的中藥進(jìn)行研究,尤其是結(jié)合指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評價中顯示出了亮眼的優(yōu)勢意向。比較土茯苓藥材的UPLC-UV和HPLC-UV指紋圖譜意料之外,結(jié)果顯示HPLC需要75 min才能完成分析,而UPLC在10 min內(nèi)完成了色譜分離形式,大大節(jié)省了分析時間置之不顧。采用UPLC-UV法對大黃中5種蒽醌衍生物進(jìn)行分析測定,結(jié)果顯示HPLC需要30min才能完成分析數字化,而UPLC在3min內(nèi)即完成色譜分離方便,分析效率提高了10倍。針對HPLC難以分離的紅參類藥材各領域,開展了基于UPLC-UV的紅參研究應用領域,得到了高分離度和高純度的色譜指紋圖譜,該研究建立的方法具有專屬性強(qiáng)進行培訓、分離度高發展機遇、色譜峰純度高的特點(diǎn),可用于人參類藥材的品種鑒定和質(zhì)量控制組織了。
針對一些含皂苷類或化學(xué)成分無紫外吸收的中藥服務體系,UPLC-ELSD則優(yōu)勢盡顯。采用UPLC-UV-ELSD法對6個產(chǎn)地28個批次西洋參藥材的指紋圖譜進(jìn)行聚類分析搶抓機遇、主成分分析及相似度評價等研究分析,為西洋參藥材的品質(zhì)評價提供了參考方法。建立了UPLC-ESLD法同時測定北柴胡藥材中柴胡皂苷a全面闡釋、c非常激烈、d的含量,是評價北柴胡藥材質(zhì)量的一種較好的方法引人註目。建立超聲輔助固液萃取與UPLC-ELSD相結(jié)合同時提取和測定天然牛黃和替代品中6種膽汁酸含量的方法領域,測定結(jié)果顯示,這些樣品的內(nèi)在質(zhì)量存在一定差異。利用UPLC-ELSD指紋圖譜分析和測定生物堿來研究貝母硫熏蒸過程的潛在破壞作用註入新的動力,該研究表明硫熏蒸對樣品中的主要活性成分損失較大領先水平。
2. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中成藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用
由于中成藥的化學(xué)成分比單味藥材的化學(xué)成分更加復(fù)雜雙重提升,常規(guī)HPLC往往在較短的時間內(nèi)很難獲得分離度較高的色譜圖戰略布局,超高效液相色譜UPLC的高分離度幫助藥學(xué)工作者可以更好地應(yīng)對分離中成藥中復(fù)雜成分的挑戰(zhàn)。利用UPLC-UV對益*草顆粒和益*草膏中的益母草堿進(jìn)行了含量測定表現明顯更佳,進(jìn)一步完善了益母草制劑的質(zhì)量控制方法更為一致。運(yùn)用UPLC-UV對葛根芩連湯中11種成分進(jìn)行了含量測定,結(jié)果表明新建立的質(zhì)控方法具有更好的質(zhì)量評控力技術的開發。運(yùn)用UPLC-UV比較了三七原料藥和顆粒劑中5種成分的含量差異研究與應用,定性、定量地評價了三七不同產(chǎn)品的質(zhì)量信息更高效,獲得比較滿意的結(jié)果全面協議。建立UPLC-DAD-ELSD切換波長法并應(yīng)用于酸棗仁顆粒中8種成分的含量測定,對酸棗仁顆粒的質(zhì)量控制評價提供了參考方法影響。利用UPLC-UV建立了復(fù)方芪麻膠囊的指紋圖譜新的動力,并定量測定了8種成分,建立了該制劑一種比較全面的質(zhì)量評價方法發展契機。利用UPLC-UV建立了葛*芩*丸的指紋圖譜及7種成分的定量測定方法廣泛關註,與之前單一質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)相比,提升了其質(zhì)量控制水平發力。
3. UPLC與MS聯(lián)用在中藥/中成藥成分辨識中的應(yīng)用
超高效液相色譜UPLC與質(zhì)譜(mass spectrometer優勢領先,MS)檢測器聯(lián)用可以改善質(zhì)譜檢測結(jié)果的質(zhì)量。由于低流速下色譜峰擴(kuò)散較小共創美好,增加了峰濃度推動並實現,有利于提高離子源的效率。同時UPLC強(qiáng)大的分離能力有助于目標(biāo)化合物和與之競爭電離的雜質(zhì)峰的分離覆蓋範圍,從而使MS的靈敏度由于離子抑制現(xiàn)象的減弱而得到進(jìn)一步的提高優化程度。故UPLC與MS聯(lián)用可以獲得靈敏度更高、質(zhì)量更好的信息奮勇向前,在提高分離效能不斷豐富、縮短分析時間的同時大大提高了檢測靈敏度,有利于中藥或中成藥中復(fù)雜成分的分析組建。
運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS快速分析了人參根中的皂苷類化合物各有優勢,共鑒定出27種化合物,新建立的方法成功地應(yīng)用于分析同一產(chǎn)地重要的意義、不同生長時間的人參干燥主根中皂苷的差異持續。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS對未加工和加工的黃連進(jìn)行了化學(xué)成分分析等多個領域,共鑒定出了13種化合物,其中有3種是初檢測出產品和服務,結(jié)合主成分分析結(jié)果表明2種不同加工方式的黃連化學(xué)成分存在顯著差異應用擴展。在參*扶正注*液中運(yùn)用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS分離鑒定了81個主要成分,包括有機(jī)酸的方法、氨基酸實事求是、寡糖和生物堿等,為該制劑的質(zhì)量評控奠定了基礎(chǔ)落到實處。建立了HPLC-Q-TOF-MS快速鑒定三葉青化學(xué)成分的方法,并用UPLC-Q-MS測定三葉青中4種成分的含量最新,結(jié)果表明建立的UPLC-Q-MS定量分析方法快捷技術創新、準(zhǔn)確,為綜合評價三葉青的質(zhì)量提供參考重要作用。運(yùn)用UPLC- DAD-Q-TOF-MS對連**瘟膠囊的主要成分進(jìn)行定性持續向好、定量分析,通過比較保留時間和精確質(zhì)量測定及參考化合物或文獻(xiàn)數(shù)據(jù)充足,初步確定了包括類黃酮進展情況、苯丙素類、蒽醌類綠色化發展、三萜類等61種化合物至關重要。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS分析了不同產(chǎn)地泥附子的化學(xué)成分差異,為從次生代謝產(chǎn)物多樣性揭示附子道地性的形成機(jī)制提供了新的參考用上了。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS對3種不同種類升麻的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析提升行動,共鑒定出32種共有組分以及8種不同成分,為進(jìn)一步研究3個不同品種的升麻提供了參考關註。運(yùn)用UPLC-TQ-MS法研究了丹*軟膠囊中不同活性成分的溶出規(guī)律研究進展,為該中成藥的質(zhì)量評控提供了參考。
4. UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)分析中的應(yīng)用
代謝組學(xué)是目前研究中藥藥理作用機(jī)制和發(fā)現(xiàn)活性成分的手段之一連日來,UPLC-MS技術(shù)為中藥代謝組學(xué)分析提供了技術(shù)平臺快速融入。超高效液相色譜UPLC可與多種類型的質(zhì)譜串聯(lián),高分辨質(zhì)譜包括飛行時間(TOF)系統、四極桿-飛行時間(Q-TOF)增強、串聯(lián)飛行時間(TOF-TOF)及離子阱-飛行時間(IT-TOF)質(zhì)譜等。UPLC與高分辨質(zhì)譜串聯(lián)可應(yīng)用于中草藥非靶向代謝組學(xué)的研究形式,尤其是UPLC-Q-TOF/MS能夠更好地用于代謝物和同分異構(gòu)體的分離鑒定置之不顧。此外,UPLC還可與三重四級桿或四極桿離子阱(Q-IT)等串聯(lián)應(yīng)用于中藥靶向代謝組學(xué)分析數字化。目前方便,新型的串聯(lián)質(zhì)譜如四極桿線性離子阱(Q-Trap)質(zhì)譜由于具有較強(qiáng)的定性和定量能力,與UPLC聯(lián)用在中藥非靶向代謝組學(xué)及靶向代謝組學(xué)方面逐漸得到應(yīng)用。研究嶺南山竹子Garcinia oblongifoliaChamp.ex Benth. 的葉傳遞、枝和果實(shí)的比較代謝譜和生物活性融合,使用UPLC-Q-TOF/MS共鑒定了40種化合物,結(jié)合化學(xué)計量學(xué)分析相關性,揭示了所研究的3種植物代謝物譜的變化和生物活性差異相關(guān)聯(lián)完成的事情,表明UPLC-Q-TOF/MS可用于鑒定在單個物種的不同部位中差異表達(dá)的生物活性成分。提出了一種基于目標(biāo)糖組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)策略的綜合色譜技術(shù)穩定,利用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS同時分離鑒定地黃的碳水化合物和次級代謝物取得了成功改造層面,并進(jìn)一步闡明了碳水化合物和次級代謝產(chǎn)物的化學(xué)轉(zhuǎn)化機(jī)制,從而揭示了碳水化合物和次生代謝產(chǎn)物之間固有的化學(xué)聯(lián)系優勢與挑戰。利用UPLC-MS背景扣除法聯(lián)合代謝組學(xué)技術(shù)研究了柴胡-白芍藥對配伍前后化學(xué)成分的整體變化情況經驗分享,從整體化學(xué)組成上比較了柴胡-白芍藥對配伍前后的差異,為其配伍機(jī)制的闡釋奠定了基礎(chǔ)趨勢。利用基于超高效液相色譜/電噴霧電離synapt高清質(zhì)譜(UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS)結(jié)合模式識別方法研究了酸棗仁湯治療失眠癥的代謝特征和治療效果有力扭轉,鑒定出20種離子作為“分化代謝物”,結(jié)果表明酸棗仁湯的治療效果可能通過5-羥色胺能激活介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)一站式服務,該研究結(jié)果還表明UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS技術(shù)可用于中藥的代謝物分析廣度和深度,開辟了使用代謝組學(xué)解決特殊中藥問題的新視角。利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技術(shù)對復(fù)方祖*麻片抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的血漿代謝組學(xué)進(jìn)行研究引領作用,結(jié)果表明復(fù)方祖*麻片主要通過下調(diào)繼發(fā)性病變期溶血磷脂酰*堿的水平而達(dá)到治療效果加強宣傳。
由于樣品組分的分離在先,離子化和檢測在后效率和安,因而能夠有效地減少干擾設計能力,諸如基質(zhì)效應(yīng)、離子化抑制深入開展、離子化競爭等更為一致,大幅度增加代謝物的鑒別數(shù)量和準(zhǔn)確度。UPLC-MS除了分析速度快技術的開發、樣品無需衍生化等優(yōu)點(diǎn)研究與應用,UPLC的高分離度使得峰寬變窄、信噪比增強(qiáng)更高效,從而提高了生物樣品分析的選擇性和靈敏度全面協議。因此,與傳統(tǒng)HPLC相比具體而言,UPLC能獲得中藥更多代謝物的信息工具,對于復(fù)雜生物樣品的分離具有顯著優(yōu)勢,UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)研究中將發(fā)揮越來越重要的作用發揮重要作用。
5. UPLC與MS聯(lián)用在中藥真菌毒素分析中的應(yīng)用
目前中藥的安全性檢測受到越來越多的關(guān)注和研究醒悟,但是中藥含有真菌毒素往往是微量(1~100 μg/g)數據顯示、痕量(0.01~1 μg/g)級別,常規(guī)分析手段往往很難到達(dá)檢測限和定量限也逐步提升。超高效液相色譜UPLC與MS聯(lián)用帶來的高靈敏度幫助藥學(xué)工作者可以很好地定量分析中藥中的真菌毒素記得牢。建立了一種基于QuEChERS-UPLC-Q-MS/MS法定量測定白茅根中16種真菌毒素,充分利用UPLC的高分離度重要的作用,獲得了較好的結(jié)果更多可能性。建立了UPLC-MS/MS法同時測定麥芽中11種真菌毒素的污染水平,通過相同保留時間處的特征離子二級碎片排除了假陽性結(jié)果足夠的實力,檢測限和定量限分別為0.05~30.00 μg/kg和0.15~87.50 μg/kg緊迫性,表明該方法可以準(zhǔn)確、靈敏更適合、快速地監(jiān)測麥芽受真菌毒素污染的狀況多元化服務體系。使用UHPLC-MS/MS法測定淡豆豉、麥芽擴大公共數據、薏苡仁和酸棗仁中黃曲霉毒素的含量,結(jié)果顯示不同藥材的黃曲霉毒素G2帶動擴大、G1核心技術體系、B2、B1的檢出限分別為0.04~0.1 μg/kg持續發展、0.01~0.02 μg/kg必然趨勢、0.01~0.03 μg/kg和0.02~0.03 μg/kg,表明了該方法具有較高的靈敏度擴大。采用UPLC-MS/MS法對三七多樣性、黨參和柴胡中的黃曲霉毒素進(jìn)行了檢測,該研究表明分離條件對分離結(jié)果有一定影響新格局,3種藥材中曲霉屬真菌的污染值應(yīng)得到重視明顯。建立了一種基于ESI-LC/MS同時檢測三七藥材中10 種真菌毒素方法,結(jié)果表明該方法凈化效果好顯示、靈敏度高創新為先、重復(fù)性好,適用于成分復(fù)雜的三七藥材中多種真菌毒素的定量檢測科普活動。對決明子創新延展、菟絲子、薏苡仁等12種藥材種子中黃曲霉毒素G2狀況、G1機製性梗阻、B2、B1和赭*霉*素A進(jìn)行了測定全過程,結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素B1集成應用、B2探討、G1、G2和赭*霉*素A在12種藥材種子中的檢出率較低使用,但一旦檢測到即為高水平合規意識。實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確地同時測定多種真菌毒素一直是中草藥分析領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)有效性,UPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)將會越來越多地應(yīng)用于中藥的真菌毒素分析創新內容。
在實(shí)際應(yīng)用中由于UPLC使用的色譜柱柱填料較小,為防止堵塞廣泛關註,樣品前處理要求更加嚴(yán)格善於監督。超高效液相色譜UPLC是在HPLC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,由于UPLC能夠提高色譜分離度就能壓製、縮短分析時間更合理、提高分析效率、節(jié)省溶劑消耗更優美,同時提供智能化的分析各方面,確保分析數(shù)據(jù)的可靠性和高效率,因此將成為中藥分析領(lǐng)域的主要分析手段成效與經驗,其應(yīng)用將會越來越多適應性。
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