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什么是凝膠電泳
那么下面為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于什么是凝膠電泳:
電泳是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種技術(shù)集成技術,用于根據(jù)大小分離帶電分子,例如DNA更合理。
凝膠電泳是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種技術(shù)適應能力,用于分離帶電分子,例如DNA 各方面,RNA 和蛋白質(zhì)防控。根據(jù)它們的大小。
當(dāng)電流通過凝膠時(shí)適應性,帶電分子穿過凝膠深刻內涵。
在凝膠上施加電流,以使凝膠的一端帶正電荷融合,而另一端帶負(fù)電荷深入闡釋。
帶電分子的運(yùn)動(dòng)稱為遷移。分子向相反電荷遷移完成的事情。因此物聯與互聯,帶負(fù)電荷的分子將被拉向正末端(相反的方向吸引!)改造層面。
凝膠由可滲透的基質(zhì)(有點(diǎn)像篩子)組成供給,當(dāng)電流通過時(shí),分子可以穿過該基質(zhì)經驗分享。
較小的分子在凝膠中的遷移速度更快解決方案,因此比較大的分子遷移速度更慢,因此遷移距離更短有力扭轉,因此較大的分子可以遷移上高質量。結(jié)果,分子按大小分開廣度和深度。
凝膠電泳和DNA
電泳使您能夠區(qū)分不同長(zhǎng)度的DNA片段深入交流。
DNA帶負(fù)電,因此加強宣傳,當(dāng)電流施加到凝膠上時(shí)臺上與臺下,DNA會(huì)向帶正電的電極遷移。
較短的DNA鏈比較長(zhǎng)的DNA鏈穿過凝膠的速度更快技術發展,從而導(dǎo)致片段按大小順序排列集聚效應。
使用染料集成,發(fā)熒光?標(biāo)簽還是放射性的確定性?標(biāo)記使分離后的凝膠上的DNA可見更加廣闊。它們將在凝膠上顯示為條帶。
具有已知長(zhǎng)度片段的DNA標(biāo)記通常與樣品同時(shí)在凝膠中穿行相貫通。
通過將DNA樣品的條帶與DNA標(biāo)記的條帶進(jìn)行比較不斷發展,可以算出樣品中DNA片段的大致長(zhǎng)度。
凝膠電泳如何進(jìn)行自動化方案?
準(zhǔn)備凝膠
瓊脂糖凝膠緊密協作?通常用于可視化DNA片段。用于制作凝膠的瓊脂糖濃度取決于您正在使用的DNA片段的大小線上線下。
瓊脂糖濃度越高發揮重要作用,基質(zhì)越致密,反之亦然數據顯示。較小的DNA片段在較高濃度的瓊脂糖上分離高質量,而較大的分子需要較低濃度的瓊脂糖。
為了制備凝膠記得牢,將瓊脂糖粉與電泳緩沖液混合并加熱至高溫註入了新的力量,直到所有瓊脂糖粉融化為止。
然后將熔化的凝膠倒入凝膠澆鑄盤中更多可能性,并在一端放置一個(gè)“梳子”去創新,以制成用于移液的孔。
凝膠冷卻并固化后(現(xiàn)在將是不透明而不是透明的)緊迫性,將梳子移開結構。
現(xiàn)在,許多人都使用預(yù)制的凝膠高效。
然后將凝膠放入電泳槽中溝通協調,并將電泳緩沖液倒入槽中,直到覆蓋凝膠表面為止體系。緩沖器傳導(dǎo)電流保障性。所用緩沖液的類型取決于樣品中DNA片段的大致大小。
準(zhǔn)備用于電泳的DNA
在電泳之前將染料添加到DNA樣品中開拓創新,以增加樣品的粘度持續發展,這將防止其浮出孔,從而可以看到樣品通過凝膠的遷移促進善治。
將DNA標(biāo)記物(也稱為大小標(biāo)準(zhǔn)品或DNA階梯)裝入凝膠的**個(gè)孔中。標(biāo)記中的片段長(zhǎng)度已知發展的關鍵,因此可用于幫助估計(jì)樣品中片段的大小道路。
然后將制備的DNA樣品吸移到凝膠的其余孔中規模設備。
完成此操作后,將蓋子放在電泳槽上指導,確保凝膠以及正負(fù)電極的方向正確(我們希望DNA跨凝膠遷移至正端)競爭力。
分離碎片
然后打開電流,使帶負(fù)電荷的DNA穿過凝膠向凝膠的正側(cè)移動(dòng)進一步完善。
較短長(zhǎng)度的DNA移動(dòng)的速度快于較長(zhǎng)長(zhǎng)度的DNA集聚,因此在運(yùn)行電流時(shí)移動(dòng)的距離更遠(yuǎn)。
DNA遷移到凝膠中的距離可以通過監(jiān)視上樣緩沖液染料的遷移來直觀判斷調整推進。
留下的電流要足夠長(zhǎng)狀況,以確保DNA片段在凝膠上移動(dòng)的距離足以將它們分開,但不要過長(zhǎng)以至于它們從凝膠末端流出機製。
用于按大小分離DNA片段的DNA電泳設(shè)備插圖全過程。凝膠位于緩沖罐中。將DNA樣品置于凝膠一端的孔中探討,并且電流流過凝膠不負眾望。帶負(fù)電荷的DNA向正電極移動(dòng)。圖片來源:Genome Research Limited
可視化結(jié)果
一旦DNA在凝膠上遷移足夠遠(yuǎn)調解製度,就將電流切斷精準調控,并將凝膠從電泳槽中移出。
為了使DNA可視化應用的因素之一,用與DNA結(jié)合的熒光染料對(duì)凝膠進(jìn)行染色信息化,然后將其放在紫外透射儀上,該透射儀將被染色的DNA顯示為亮帶相對簡便。
或者高質量,染料可以在倒入之前與凝膠混合。
如果凝膠正確運(yùn)行更合理,將可見DNA標(biāo)記物/大小標(biāo)準(zhǔn)品的條帶模式適應能力。
然后可以通過想象一條橫穿DNA標(biāo)記帶的水平線來判斷樣品中DNA的大小。然后各方面,您可以通過將它們與標(biāo)記中**接近的條帶進(jìn)行匹配來估計(jì)樣品中DNA的大小防控。
顯示脫氧核糖核酸帶的例證在凝膠分離了。將DNA片段的長(zhǎng)度與包含已知長(zhǎng)度的片段的標(biāo)記進(jìn)行比較適應性。
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