線粒體提取試劑盒
英文名稱
mitochondrial extraction kit
規(guī)格
50T ; 100T
儲存條件
四周內(nèi)使用可4℃儲存體系，長期保存請置于-20℃。冰袋運輸
單位
盒

線粒體提取試劑盒

線粒體提取試劑盒

操作步驟：

1. 樣本處理 a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟服務延伸、腦共創輝煌、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗進一步，洗凈血水大部分，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer解決方案，0℃冰浴上下研磨組織20次優勢； b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌增產，800g離心5~10 min收集細胞便利性，計數(shù)。每次提取需要5×10⁷個細胞行動力，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞提供有力支撐，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨30~40次保供。

2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管自行開發，4℃，1000g 離心5 min責任。

3. 取上清應用情況，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃組建，1000g再次離心5 min表現。

4. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中深刻變革，4℃結論， 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分質生產力，可從中提取胞漿蛋白智能化。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底處理。

5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃重要的，1000 g 離心5 min開展研究。

6. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中相互融合，4℃首要任務， 12,000 g 離心10 min。棄上清不同需求，高純度的線粒體沉淀在管底方式之一。

7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀先進水平，立即使用或-70℃保存。

注意事項：

1. 為保證獲得完整的線粒體，務(wù)必做到：第一提供深度撮合服務，全程低溫操作；第二，快速；第三最為突出，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞，這是制備線粒體的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)相結合。與組織塊相比高效化，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器為產業發展、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞範圍和領域。

2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度各項要求。

3. 進行Western Blot和2D-膠電泳更高要求，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。 

轉(zhuǎn)速與離心力換算：1.11×10^(-5)×R×(rpm)^2 G為離心力共謀發展，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示學習；

[rpm]^２即：轉(zhuǎn)速的平方； 

R為半徑聽得懂，單位為厘米應用優勢。