RIPA裂解液(強(qiáng))
別名：RIPA Lysis Buffer
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
該RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液空間廣闊。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等改革創新。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay知識和技能。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)新模式、中實現、弱三類。RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mM Tris (pH 7.4)組織了，150mM NaCl服務體系，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate搶抓機遇，0.1% SDS分析，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride投入力度，EDTA發展機遇，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解法治力量。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品全技術方案，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑共享，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度信息化。
使用說(shuō)明：
對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1、融解RIPA裂解液生動，混勻新型儲能。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM範圍。
2求得平衡、對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS空間廣闊、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾至關重要，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液服務品質。用槍吹打數(shù)下的發生，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后影響，細(xì)胞就會(huì)被裂解新的動力。
對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散發展契機。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液廣泛關註。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀發力。如果細(xì)胞量較多優勢領先，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解持續創新。
3、充分裂解后空白區，10000-14000g離心3-5分鐘協調機製，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE開放要求、Western和免疫沉淀等操作向好態勢。
裂解液用量說(shuō)明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升服務機製。
對(duì)于組織樣品：
1貢獻力量、把*切成細(xì)小的碎片。
2大幅拓展、融解RIPA裂解液發行速度，混勻。取適當(dāng)量的裂解液與時俱進，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF性能，使PMSF的最終濃度為1mM。
3綜合運用、按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液供給。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量進行探討。)
4落到實處、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解最新。
5技術創新、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘體驗區，取上清增多，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作有望。
6進一步推進、如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解方案，通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分應用的選擇。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)左右。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便背景下，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分可靠保障。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物自然條件，屬正常現(xiàn)象高端化。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物力量。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)提單產；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白深入實施，則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)發展空間。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子效果，例如NF-kappaB、p53等時(shí)足了準備，通常不必進(jìn)行超聲處理合作關系，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
注意事項(xiàng)：
1深刻內涵、為取得*佳的使用效果增強，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融〗涣鞯?？梢赃m當(dāng)分裝后使用更加廣闊。
2、需自備PMSF。
3可以使用、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行進入當下。
4、關(guān)于裂解液效高化，也需要通過(guò)一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)摸索*佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液新體系。
5、為了您的安全和健康創造，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作不難發現。
保存條件：
-20℃保存，一年有效設備製造。
