Western及IP細(xì)胞裂解液
別名：Cell lysis buffer for Western and IP
產(chǎn)品簡介：
Western及IP細(xì)胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)資料，是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本細(xì)胞裂解液裂解的細(xì)胞關註度，可以用于PAGE橫向協同，Western，免疫沉淀(immunol precipitation敢於挑戰，IP)和免疫共沉淀(co-IP)不斷創新。
Western及IP細(xì)胞裂解液的主要成分為20mM Tris (pH7.5)，150mM NaCl提供了遵循，1% Triton X-100參與水平，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate服務效率，EDTA情況較常見，Na3VO4，leupeptin等多種抑制劑主要抓手◇w製？梢杂行б种频鞍椎慕到猓⒕S持原有的蛋白間相互作用創新科技。用Western及IP細(xì)胞裂解液裂解得到的蛋白樣品服務延伸，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)具有重要意義，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度進一步。
使用說明：
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：
1大部分、融解Western及IP細(xì)胞裂解液，混勻實際需求。取適當(dāng)量的裂解液解決方案，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM交流。
2基礎、對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS還不大、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(若血清中的蛋白沒有干擾高產，可不洗)。按照6孔板每孔加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液發揮作用。用槍吹打數(shù)下良好，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后銘記囑托，細(xì)胞就會被裂解引領。
對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散示範。按照6孔板每孔細(xì)胞加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液應用前景。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)無明顯的細(xì)胞沉淀製度保障。如果細(xì)胞量較多預下達，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分統籌推進，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸方案，相對比較容易裂解充分。
3了解情況、充分裂解后深入，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清重要的，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE開展研究、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作相互融合。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加100ul裂解液已經(jīng)足夠首要任務，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到150或200ul。
對于組織樣品：
1不同需求、把*切成細(xì)小的碎片發展。
2解決方案、融解Western及IP細(xì)胞裂解液各項要求，混勻。取適當(dāng)量的裂解液服務體系，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF用的舒心，使PMSF的最終濃度為1mM結構。
3意見征詢、按照每20mg組織加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液逐漸完善。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品自動化，可以適當(dāng)減少裂解液的用量提升。)
4、用玻璃勻漿器勻漿落地生根，直至充分裂解的特點。
5健康發展、充分裂解后有效保障，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清長效機製，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE講實踐、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作奮戰不懈。
6市場開拓、如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解大大縮短，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分要落實好。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)更默契了。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便先進技術，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分不合理波動。
注意事項(xiàng)：
1宣講手段、為取得*佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融積極拓展新的領域∨涮自O備？梢赃m當(dāng)分裝后使用。
2相對開放、需自備PMSF推進高水平。
3、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行拓展應用。
4生產創效、可能需要通過一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索*佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。
5實現了超越、為了您的安全和健康新產品，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作去完善。
保存條件：
-20℃保存，一年有效長遠所需。
