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LBA4404 電轉化感受態(tài)細胞

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LBA4404 電轉化感受態(tài)細胞南京賽泓瑞生物在感受態(tài)細胞的研發(fā)方面,實力雄厚合作關系,擁有了克隆著力提升、表達、酵母和農(nóng)桿菌4大類傳遞,共計百余種感受態(tài)細胞融合。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌 電轉化感受態(tài)細胞和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類相關性,*提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率完成的事情。

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LBA4404農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞


  LBA4404 Electroporation-Competent Cell

產(chǎn)品編碼:                          保存條件: -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

LBA440420×50μl
pCAMBIA2301control vector10ng/ul,       10ul

                

LBA4404農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞基因型:
Ach5 (rif R) Ti pAL4404 (strepR) Octopine

LBA4404農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞簡要說明:
 LBA4404菌株為Ach5型背景,核基因中含有篩選標簽——*抗性基因rif穩定,為了便于轉化操作進入當下,此菌株攜帶一無自身轉運功能的章魚堿型Ti質(zhì)粒pAL4404,此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件效高化,pAL4404質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)投入力度。 
pAL4404Ti質(zhì)粒含有篩選標簽:strep創造,賦予LBA4404菌株*抗性,適用于菸草貢獻法治、番茄設備製造、煙草等植物的轉基因操作。開發(fā)的LBA4404電轉感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉化:經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒(size:11633bp)檢測轉化效率可達104cfu/μg攻堅克難;經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒(size:40kd)檢測轉化效率可達103cfu/μg管理。
 

LBA4404農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞操作說明:

1. 0.2cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分雙向互動,正置5分鐘效率和安,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中品牌,壓實冰面深入開展,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫應用。

  1.  -80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘建議,待其融化,加入1-5ug質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒體積不大于6ul相貫通,用試劑盒抽提不斷發展,雙蒸水溶解)積極影響,用手管底混勻,立即插入冰中緊密協作,用200ul槍頭將感受態(tài)-質(zhì)猎絹碓街匾?;旌衔锟焖僖频诫姄舯校w上杯蓋穩定性,空管保留待用像一棵樹。
  2.  啟動電轉儀,設置參數(shù):C=25uF去突破,PC=200ohm能運用,V=2400V(此參數(shù)為Biorad *,使用者也可按所用電轉儀*的protocol操作)智能設備,將電擊杯快速放入電轉槽中不可缺少,電擊完成快速插入冰中,加入700ul 無抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中特點,28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時積極回應。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LBYEB平板上又進了一步,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當平板只含有50ug/ml kan 時多種場景,28℃培養(yǎng)48h即可;平板中同時加入50ug/ml kan規劃,20ug/ml rif 時擴大公共數據,需28℃培養(yǎng)60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h)帶動擴大。

 

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