SF17A昆蟲細胞無血清培養(yǎng)基 SF17A是一種適于昆蟲細胞培養(yǎng)的無血清無蛋白培養(yǎng)基，含有Pluronic F-68能力建設、*關註、*。

SF17A昆蟲細胞無血清培養(yǎng)基

品名：SF17A昆蟲細胞無血清培養(yǎng)基

貨號：SF10105-2

規(guī)格：1L

價格：270元

產(chǎn)品介紹：

SF17A是一種適于昆蟲細胞培養(yǎng)的無血清無蛋白培養(yǎng)基無障礙，含有Pluronic F-68連日來、*快速融入、*。針對Sf9 系統、Sf21和High-Five 昆蟲細胞系的無血清培養(yǎng)而開發(fā)和優(yōu)化就能壓製，適于通過昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)表達外源蛋白，使用該培養(yǎng)基可獲得高滴度野生型AcNPV適應能力。細胞可以從無血清或者添加血清的培養(yǎng)基中直接轉移到SF17A中進行傳代培養(yǎng)更優美，而無需經(jīng)過適應。該培養(yǎng)基可以支持Sf9防控、Sf21和High-Five 細胞貼壁或者懸浮生長成效與經驗。Sf9 、Sf21和High-Five 細胞在SF17A培養(yǎng)基中通硤詫嵒A？梢赃_到1×10 7 cells/ml 的細胞密度稍有不慎，細胞活性大于95%，傳代超過20 次而細胞活性不降低等地。

細胞復蘇：

1.迅速將凍存的細胞放入37 度水浴中（<1min）最為顯著。

2.將凍存管中的細胞轉移到合適的培養(yǎng)容器中，用預熱過的培養(yǎng)基將細胞稀釋至0.5～0.8×106 cells/ml物聯與互聯。

3.將細胞放入生化培養(yǎng)箱（無濕度穩定、二氧化碳控制）中的搖床上，27±0.5°C 供給，90～120 rpm優勢與挑戰。

4.當細胞密度達到2×106 cells/ml 以上時進行傳代培養(yǎng)。建議在蛋白或者病毒制備前細胞應至少傳代三次以上解決方案。

細胞懸浮培養(yǎng)傳代

昆蟲細胞對剪切力非常敏感趨勢，必須保證攪拌培養(yǎng)過程中槳葉不能與容器壁或者容器底部接觸。

1.使用自動或者半自動細胞計數(shù)儀上高質量，或者手動計數(shù)的方法測定細胞密度一站式服務。

2.向無菌容器中加入預熱的培養(yǎng)基，將細胞按照0.5～0.8×106 cells/ml 的密度接種其中（125ml 的搖瓶可以接種20～30 ml深入交流，100 ml 的轉瓶（spinner bottle）可以接種50～75 ml）引領作用。

3.培養(yǎng)箱溫度27±0.5°C ，不需要濕度和二氧化碳控制臺上與臺下。

4.搖床轉速90-120 rpm用的舒心，轉瓶攪拌轉速設定為60～95 rpm（因儀器參數(shù)不同，建議在培養(yǎng)時對轉速進行優(yōu)

化）集聚效應。

5.當細胞密度達到2×106 cells/ml 以上時集成，可以進行傳代。

注意：如果觀察到培養(yǎng)物中有細胞碎片，建議將細胞懸液100 g 離心5～10 min更加廣闊，棄上清損耗，用新鮮培養(yǎng)基將細胞重懸，這樣可減少細胞碎片和代謝副產(chǎn)物的積累非常完善。

注意：建議控制細胞培養(yǎng)代次性能穩定，每隔一段時間需要重新復蘇一支低代次的細胞

細胞貼壁培養(yǎng)傳代

1.當細胞達到80~90%匯合度時，將培養(yǎng)上清去除緊密協作。

2.添加4 mL 預熱培養(yǎng)基（25 cm2）越來越重要，反復吹打制備細胞懸液。

3.觀察細胞是否全部脫落發揮重要作用。

4.如果部分細胞結團醒悟，將全部細胞轉移到離心管中，靜止1~2 min高質量，細胞團會沉降到離心管的底部也逐步提升。用槍頭輕輕碾壓細胞團促使細胞分散。如果細胞團比較大註入了新的力量，可以重以上步驟重要的作用。用槍頭吹打過重會造成細胞活性降低。

5.計數(shù)細胞密度去創新。

6.按照2~8×104 cells/cm2 的密度接種到新培養(yǎng)瓶中足夠的實力，培養(yǎng)基按照5 mL/cm2 的量進行添加。

7.置于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)結構，27±0.5°C 更適合，不需要濕度和二氧化碳控制。

8.培養(yǎng)三天后將培養(yǎng)上清去除溝通協調，靠近方瓶一側將新鮮培養(yǎng)基緩慢添加到方瓶中要素配置改革。

注意：Sf9 細胞為非貼壁依賴型細胞，可以在貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)兩種培養(yǎng)模式之間進行多次轉換保障性，而且細胞活性帶動產業發展、形態(tài)和生長速率基本無區(qū)別。

將細胞適應至SF17A培養(yǎng)基中十分落實，在適應過程中倍增效應，細胞活性非常重要，必須不低于90%製造業，并處于對數(shù)生長中期多樣性。

直接懸浮適應

單層培養(yǎng)的細胞，只需要在傳代時直接將培養(yǎng)基更換為SF17A規模設備。

按照以下步驟將懸浮培養(yǎng)的細胞轉移至該培養(yǎng)基中：

1.將細胞懸液100×g 離心5～10 min，將上清去除指導。

2.使用預熱過的SF17A培養(yǎng)基將細細胞重懸競爭力，細胞密度不低于8×105 cells/mL充分，轉移至合適的容器中進行

培養(yǎng)。

3.置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)集聚，監(jiān)測細胞生長情況競爭力。

逐步適應

按照貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)傳代方法和以下方法進行逐步適應。

1.在適應過程中細胞密度不低于0.8×106 cells/mL狀況。

2.在傳代培養(yǎng)過程中逐步增加SF17A培養(yǎng)基的比例機製性梗阻，SF17A培養(yǎng)基與初始培養(yǎng)基的比例逐漸升高（25:75，

50:50全過程，75:25集成應用，全部的SF17A）。在某個比例培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)有可能要多次傳代培養(yǎng)不負眾望。

細胞凍存

1.準備處于對數(shù)生長中期的細胞高效流通，細胞活性>90%。

2.確定需要的細胞數(shù)量和凍存液體積精準調控，凍存液中細胞密度應達到0.5～1.0 × 107 cells/ml功能。

3.凍存液由82.5%SF17A，7.5% DMSO解決，10% 胎牛血清組成（血清也可以不添加）預期。凍存液4°C 保存。

4.將培養(yǎng)物100 g 離心6 min幅度，去除上清結構，使用凍存液重懸細胞。

5.根據(jù)培養(yǎng)規(guī)模將細胞分裝于合適的凍存管中適應能力，如4.5 ml～5.0 ml/支更優美。

6.細胞可以在液氮中*穩(wěn)定保存，但不確定長保存期限防控。

貨號及規(guī)格：

液體：

SF17A培養(yǎng)基成效與經驗，1L 液體，SF10105-2__