產(chǎn)品品牌：Invitrogen
產(chǎn)品名稱：Lipofectamine™ 2000 轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品貨號(hào)：11668-019
產(chǎn)品規(guī)格：1.5ml
產(chǎn)品描述：Lipofectamine™ 2000轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)體,在體外可以轉(zhuǎn)染許多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，對(duì)各類細(xì)胞系都可提供zui高的轉(zhuǎn)染效率參與能力，具有高效性和操作步驟簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)合理需求。脂質(zhì)體2000其轉(zhuǎn)染效率以及細(xì)胞活性取決于許多實(shí)驗(yàn)因素,如細(xì)胞密度、脂質(zhì)體

 Lipofectamine™ 2000 轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)體,在體外可以轉(zhuǎn)染許多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞充分發揮，對(duì)各類細(xì)胞系都可提供zui高的轉(zhuǎn)染效率高質量，具有高效性和操作步驟簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。脂質(zhì)體2000其轉(zhuǎn)染效率以及細(xì)胞活性取決于許多實(shí)驗(yàn)因素,如細(xì)胞密度、脂質(zhì)體和DNA的濃度共創美好、脂質(zhì)體2DNA復(fù)合物的作用時(shí)間以及是否有其它介質(zhì)成分如抗生素和血清推動並實現。

使用Lipofectamine™ 2000試劑，您可以獲得：
*在多種細(xì)胞系中具有*地轉(zhuǎn)染效率和較高水平地重組蛋白表達(dá)
*傳輸siRNA的優(yōu)異性能
*在有血清存在的情況下可保證轉(zhuǎn)染效力——轉(zhuǎn)染后無(wú)需更換培養(yǎng)基
*保證可以用于高通量應(yīng)用的試劑
*用于建立穩(wěn)定細(xì)胞系的可靠試劑Lipofectamine™ 2000試劑為大多數(shù)細(xì)胞提供了zui高的轉(zhuǎn)染效率和活性覆蓋範圍。當(dāng)存在血清或用于進(jìn)行蛋白表達(dá)的細(xì)胞系（如COS-7優化程度，CHO和293）時(shí)，Lipofectamine™ 2000尤為有效奮勇向前，效率可超過(guò)90%不斷豐富。

Lipofectamine™ 2000 轉(zhuǎn)染試劑操作流程     
事實(shí)上Lipofectamine系列產(chǎn)品操作流程都是又快又簡(jiǎn)單：稀釋DNA以及Lipofectamine 2000，混合2種稀釋液保溫20分鐘數據，加入培養(yǎng)細(xì)胞中孵育24－96小時(shí)檢測(cè)結(jié)果創新的技術。下面是Invitrogen提供的詳細(xì)流程和注意事項(xiàng)。
1顯著、轉(zhuǎn)染前一天快速增長，*消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)，細(xì)胞鋪板占，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90%高質量。細(xì)胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中激發創作。
2前景、對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.8μg-1.0μg DNA增幅最大。
3共享應用、對(duì)于每孔細(xì)胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE2000試劑標準。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘（在30分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合示範推廣。保溫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋即將展開，細(xì)胞也可以使用D-MEM培養(yǎng)大幅增加。如果D-MEM做為L(zhǎng)ipofectamine 2000的稀釋液，必須在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合傳承。
4等特點、混合稀釋的DNA（第2步）和稀釋的Lipofectamine 2000（第3步）。在室溫保溫20分鐘綠色化發展。 注意：溶液可能會(huì)混濁至關重要，但不會(huì)影響轉(zhuǎn)染。復(fù)合物可以在室溫保持6小時(shí)穩(wěn)定左右。
5背景下、直接將復(fù)合物加入到每孔中綜合措施，搖動(dòng)培養(yǎng)板，輕輕混勻自然條件。注意：如果在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染設計標準，使用含血清的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞鋪板。在加入復(fù)合物前移去生長(zhǎng)培養(yǎng)基互動互補，替換為0.5ml無(wú)血清培養(yǎng)基發揮重要帶動作用。
6、在37℃意料之外，5％的CO2中保溫24-48小時(shí)文化價值，無(wú)須去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基或者在4-5小時(shí)后更換生長(zhǎng)培養(yǎng)基也不會(huì)降低轉(zhuǎn)染活性。
7置之不顧、在細(xì)胞中加入復(fù)合物24-72小時(shí)后不斷完善，分析細(xì)胞抽提物或進(jìn)行原位細(xì)胞染色，檢測(cè)報(bào)告基因活性方便。這依賴于細(xì)胞類型和啟動(dòng)子活性基礎上。對(duì)穩(wěn)定表達(dá)，在開(kāi)始轉(zhuǎn)染一天后將細(xì)胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中應用領域，兩天后加入篩選抗生素保持競爭優勢。進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)需要數(shù)天或數(shù)周。
8發展機遇、對(duì)于96孔板培養(yǎng)長效機製，不再需要提前一天進(jìn)行細(xì)胞鋪板，而可以直接在平板中制備復(fù)合物全技術方案，然后將細(xì)胞懸浮液加入到復(fù)合物就可以了分享，這樣進(jìn)一步減少了轉(zhuǎn)染時(shí)間。這種改進(jìn)步驟已經(jīng)過(guò)293-H信息化，293-F註入了新的力量，COS-7L和CHO細(xì)胞的試驗(yàn)表現明顯更佳，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低還不大⌒盐?？旖莸牟襟E和蛋白表達(dá)細(xì)胞系的高效轉(zhuǎn)染使得Lipofectamine 2000非常適用于96孔板的高通量轉(zhuǎn)染前沿技術，比如cDNA文庫(kù)的篩選和蛋白瞬時(shí)表達(dá)不斷豐富。

脂質(zhì)體2000適用細(xì)胞株范圍
不同的轉(zhuǎn)染試劑所適用的細(xì)胞株范圍各不相同連日來。一個(gè)實(shí)驗(yàn)室常常會(huì)用到不止一種細(xì)胞株服務水平，甚至是比較特殊的細(xì)胞株攻堅克難。一個(gè)轉(zhuǎn)染試劑所適用的細(xì)胞株越多管理，當(dāng)然越受用戶的歡迎。根據(jù)Invotrogen的資料雙向互動，Lipofectamine2000已經(jīng)證實(shí)可用于高達(dá)517種細(xì)胞株效率和安，覆蓋了相當(dāng)廣的范圍設計能力。

適用的核酸類型和DNA大小
有的轉(zhuǎn)染試劑是為siRNA轉(zhuǎn)染而設(shè)計(jì)的，有的則是為DNA轉(zhuǎn)染設(shè)計(jì)深入開展。Lipofectamine 2000可以適用于包括DNA更為一致，siRNA,dsRNA, 熒光標(biāo)記的Oligo, RNA等在內(nèi)的核酸轉(zhuǎn)染，這使得Lipofectamine2000適用范圍非常廣泛技術的開發，無(wú)論是基因表達(dá)分析的DNA轉(zhuǎn)染研究與應用，或者是RNAi，Lipofectamine 2000都能勝任更高效，不需要為不同目的購(gòu)買不同試劑了全面協議。但，zui常用的DNA轉(zhuǎn)染中有一個(gè)DNA大小的問(wèn)題具體而言，太大的質(zhì)粒不那么好轉(zhuǎn)工具。

脂質(zhì)體2000用量
Lipofectamine 2000用的劑量根據(jù)說(shuō)明書(shū)，24孔板轉(zhuǎn)染每次用2ul左右喜愛，1.5ml Lipofectamine 2000大約可做750次24孔板轉(zhuǎn)染重要的角色，或者大約150次6孔板轉(zhuǎn)染。

注意事項(xiàng)     
Lipofectamine2000要求細(xì)胞鋪板密度較高發力，以90%-95%為佳優勢領先，這有助于減少陽(yáng)離子脂質(zhì)體細(xì)胞毒性造成的影響。Lipofectamine 2000可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染共創美好，并且轉(zhuǎn)染前后不需要換培養(yǎng)基推動並實現，使得操作方便了許多，但是要注意制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑覆蓋範圍，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成優化程度。
 
復(fù)合物形成后是可以加入血清。這里要特別注意檢測(cè)所用的無(wú)血清培養(yǎng)基是否能和Lipofectamine 2000匹配奮勇向前，比如已知CD293, SFMII,VP-SFM就不行不斷豐富。此外還應(yīng)該留意，如果研究的基因要求比較長(zhǎng)的表達(dá)時(shí)間規劃，比如細(xì)胞周期相關(guān)基因擴大公共數據，或者時(shí)細(xì)胞表面蛋白，選擇細(xì)胞鋪板密較低的轉(zhuǎn)染試劑帶動擴大，不適合用Lipofectamine 2000核心技術體系。

對(duì)于大多數(shù)陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑，應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑量以得到zui大的轉(zhuǎn)染效率持續發展。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例必然趨勢，通常*是1:2或者1:3，優(yōu)化可以從0.5-5之間慢慢試擴大。使用小劑量確定的優(yōu)化條件可以用于進(jìn)行大劑量的轉(zhuǎn)染多樣性，只要根據(jù)培養(yǎng)板表面比例線性增加鋪板細(xì)胞的數(shù)目發揮效力、陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑和DNA量就可以了。
 
還有轉(zhuǎn)染的時(shí)候培養(yǎng)基中不能添加抗生素明顯“踩?？股兀热?和*技術創新，一般對(duì)于真核細(xì)胞無(wú)毒處理方法，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞持續向好。這降低了細(xì)胞的活性習慣，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以進展情況，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用抗生素的積極性，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)也要避免使用抗生素。這樣至關重要，在轉(zhuǎn)染前就不必潤(rùn)洗細(xì)胞不久前。對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用*和*提升行動，因?yàn)檫@些抗生素是GENETICIN選擇性抗生素的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑能力建設。另外，為了保證無(wú)血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長(zhǎng)研究進展，使用比含血清培養(yǎng)基更少的抗生素量無障礙。
 
陽(yáng)離子脂質(zhì)體應(yīng)該在4度保存，要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋廣泛關註，因?yàn)榭赡軙?huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體氧化而影響轉(zhuǎn)染效率善於監督。當(dāng)然還有要注意質(zhì)粒的質(zhì)量，質(zhì)粒的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵就能壓製。