過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝
1 保障性、過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝特點(diǎn):
1.1 直接包裝成為假病毒顆粒帶動產業發展,對(duì)分裂和非分裂細(xì)胞均有感染作用,適合RNAi研究和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (比如神經(jīng)元細(xì)胞十分落實、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞)倍增效應。
1.2 可以通過(guò)簡(jiǎn)單方式,在短時(shí)間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的多種細(xì)胞株製造業。
1.3 可用于基因敲除優化服務策略、基因治療和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究。
1.4 無(wú)需任何轉(zhuǎn)染試劑發展基礎,操作簡(jiǎn)便兩個角度入手。
1.5 可以根據(jù)客戶(hù)需要制備多種標(biāo)記。
2、過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝原理:
慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種生產效率。構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體使命責任,與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比,一方面可以擴(kuò)增替代瞬時(shí)表達(dá)載體使用使用,另一方面情況較常見,Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過(guò)慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞主要抓手、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞體製,并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組,進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)創新科技。
3 探討、過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝流程:
3.1 含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。
注:客戶(hù)也可以提供構(gòu)建好的重組慢病毒表達(dá)載體高效流通。
3.2 慢病毒表達(dá)載體與包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞調解製度。
3.3 收集病毒液。
3.4 純化和濃縮病毒功能。
3.5 分裝應用的因素之一、- 80 oC保存。
3.6 滴度測(cè)定及無(wú)菌檢測(cè)預期。