穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株(穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選)指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá)再獲。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上,使細(xì)胞*穩(wěn)定表達(dá)該基因應用擴展。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株長(zhǎng)用于基因研究方向體驗區,便于*觀察和檢驗(yàn)基因?qū)τ诩?xì)胞功能以及蛋白的相互作用。
一般轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)方法:
用轉(zhuǎn)染質(zhì)粱顒由?;虿《厩秩镜姆椒▽?gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞有望,根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行篩選混合陽(yáng)性克隆。在陽(yáng)性混合克隆的基礎(chǔ)上導向作用,得到單細(xì)胞長(zhǎng)出的陽(yáng)性單克隆方案,繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
一般篩選方法:
1堅持好、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后即將展開,單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系
對(duì)大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對(duì)于基因過(guò)表達(dá)特性,如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%傳承,基因過(guò)表達(dá)尚可等特點。但是對(duì)于基因干擾實(shí)驗(yàn),對(duì)轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過(guò)表達(dá)多種,通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無(wú)法滿足將進一步。
另外,質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中發展成就,很快降解成就,無(wú)法滿足較長(zhǎng)時(shí)間的檢測(cè)項(xiàng)目;質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低關註,穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時(shí)耗力研究進展,且得率很低,往往需要挑取單克隆株連日來。
2快速融入、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法系統。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株增強,由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄交流等、高效表達(dá)更加廣闊、宿主范圍廣,感染效率高提高,且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排可以使用,是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選服務(wù)內(nèi)容: 1紮實、穩(wěn)定:保證15代以內(nèi)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)應用領域。
2、迅速:一般控制在1個(gè)月以內(nèi)完成構(gòu)建進行培訓。
3、經(jīng)濟(jì):價(jià)格實(shí)惠長效機製,性價(jià)比高法治力量。
4、質(zhì)量保證:對(duì)外源基因進(jìn)行嚴(yán)格鑒定分享。