一大幅拓展、免疫熒光染色服務(wù)介紹
免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理發行速度，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）與時俱進。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素性能，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色）綜合運用，可以看見(jiàn)熒光所在的細(xì)胞或組織供給，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位實事求是，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量進行探討。
二、免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)原理
將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上服務水平，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后最新，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)技術創新。
三、免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)流程
免疫熒光單標(biāo)記方法
免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子體驗區，方法比較簡(jiǎn)單增多，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問(wèn)題有望。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否導向作用，可能會(huì)直接影響染色結(jié)果方案。具體染色方法如下。
1十大行動、所需材料與試劑
a, 培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞左右。
b, 一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗綜合措施。
c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃預(yù)冷20 min)可靠保障。
d, 封閉液。
e, 0.01mol／LPBS緩沖液現場。
2高端化、染色方法
a, 取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片或glass-bottom培養(yǎng)皿，用0.01MPBS洗2-3遍我有所應。
b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain
c, 加入4%多聚甲醛試問(wèn)固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min提單產。
d，正常阻斷血清1:20封閉試問(wèn)20-30 min至關重要，抑制IgG的非特異性結(jié)合發展空間。阻斷血清必須選擇與二抗同一種屬的正常血清。
e, 去掉正常血清有所應，直接加入一抗足了準備，37℃孵育1 h或4℃過(guò)夜≈μ嵘?？贵w以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)深刻內涵。
f, 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min重要意義，0.3% TritonX 5 min交流等，0.01 M PBS洗5 rain。
g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗規劃，37℃提高，孵育1h。
h, 0.3%TritonX-100洗5rain進入當下，0.01 mol/LPBS洗5min紮實，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用濾紙吸干投入力度。
i, 90%甘油(PBS配制)封片創造。
j, 激光掃描共焦顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存貢獻法治。
免疫熒光雙標(biāo)記方法
免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子設備製造，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些攻堅克難，首先應(yīng)注意所用的一抗必須是來(lái)自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體管理，來(lái)自家兔；B抗體為單克隆抗體雙向互動，來(lái)自小鼠)效率和安。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊助力各業，且盡量遠(yuǎn)離極致用戶體驗，通常可以選擇FITC和TRITC應用、Alex488和TRITC建議、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來(lái)組合臺上與臺下。通常情況下用的舒心，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗集聚效應。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱集成，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí)，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗互動講。其他步驟同免疫熒光單標(biāo)記穩定性。
四、客戶提供
細(xì)胞株或細(xì)胞爬片過程中。注：細(xì)胞爬片不宜太密去突破；細(xì)胞必須固定。組織切片達到，一抗
五智能設備、公司提供
基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品蓬勃發展、樣品處理特點、圖片及圖片分析，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡拍攝
實(shí)驗(yàn)周期：1-3周
