當前位置:上海古朵生物科技有限公司>>公司動態(tài)>>如何選擇對的抗體?
抗體是我們實驗中常用到的檢測試劑積極回應,如果實驗室中有驗證好的抗體重要性,可以直接拿來用,是一件非常幸福的事情《嘣阵w系?扇绻龅叫碌臋z測規劃,面對形形色色的抗體,要如何選出你的 Ab. Right 呢深度?下面就容小編為你慢慢道來帶動擴大。
抗體,也就是免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig),是由兩條約50kDa的重鏈和兩條 25kDa 的輕鏈通過疏水鍵和二硫鍵的鏈接而構成開拓創新,通過重鏈和輕鏈的N端的可變區(qū)來識別抗原表位(epitope)持續發展。抗原表位可以是連續(xù)的氨基酸所構成的線性表位綜合運用,也可以是蛋白質折疊后氨基酸序列不連續(xù)但空間接近的構象表位。
依據重鏈的差別的方法,抗體可以分為不同的類和亞類實事求是。如人的抗體可分為 IgG,IgA落到實處,IgM服務水平,IgD,IgE 五類技術創新,而 IgG 又可以分為 IgG1-IgG4處理方法,四個亞類。我們常用的抗體主要是 IgG 類別的持續向好,也有少部分IgM 等其它類別的抗體習慣。
抗體不僅可用于識別蛋白質,還可以識別多糖進展情況,抗生素的積極性,DNA 等。如 Active Motif 提供的可識別不同DNA修飾的抗體(anti-5mC至關重要,anti-5hmC等)
常見的使用抗體的實驗:
Western blot: 蛋白質變性不久前,抗體識別線性表位
IHC/ICC/IF:蛋白質固定后經過修復,表位可恢復提升行動,抗體識別線性表位/構象表位
ELISA
FACS 蛋白質處于天然狀態(tài)能力建設,抗體識別線性表位/構象表位
Co-IP
ChIP:蛋白質經過固定處理,部分表位可能被掩蓋或發(fā)生變化有效性,抗體識別線性表位/構象表位
簡單的選擇抗體的方式就是查文獻看是否有相同的應用創新內容,再者是參考抗體公司的檢驗數據,會列出抗體經過哪些實驗技術的檢驗廣泛關註,以及應用相關技術所發(fā)表的文章我有所應,可幫助決定抗體是否適用并提供參考的稀釋比例。
此外還有其它一些因素在選擇抗體時需要考慮到
1. 一抗的種屬來源:一般的實驗并沒有對一抗的種屬有特定要求,但在免疫組化的實驗中至關重要,如選用與組織樣品同物種的一抗發展空間,則會因為二抗識別組織中的免疫球蛋白而影響實驗結果,因而對此類實驗應選擇不同物種的一抗有所應。此外足了準備,Co-IP 實驗中,由于后續(xù)的 western blot 時樣品中有一抗蛋白的存在著力提升,若目的蛋白的大小在 50kDa 左右且與一抗同源深刻內涵,則一抗的重鏈會對結果造成干擾,因而也應避免使用同源一抗融合。
2.二抗:二抗應選擇抗一抗同物種同類免疫球蛋白的抗體深入闡釋,如一抗為小鼠 IgG 類的抗體,則二抗則為抗小鼠 IgG 的抗體。如一抗為 IgG1 亞類規則製定,二抗可以針對這個亞類互動講,也可以用對四個亞類都有效的 anti-IgG。在此基礎上供給,再根據所需要的標記物如酶和熒光基團等來確定抗體。
3.單抗/多抗/重組抗體
單抗是指識別單一表位的抗體經驗分享。目前單抗的生產是將分泌單一抗體的 B 細胞與骨髓瘤細胞相融合形成雜交瘤細胞解決方案,通過培養(yǎng)細胞系來進行的。相對于多抗有力扭轉,單抗的特異性較高上高質量,雜帶少,在一段時期內較為穩(wěn)定廣度和深度。但由于單抗識別的表位單一攻堅克難,若表位因化學處理發(fā)生變化或表位因蛋白間或蛋白與 DNA 間的結合被掩蓋,單抗就無法發(fā)揮功能顯示。
多抗流程,也稱為抗血清或血清型抗體,它是通過純化免疫動物的血清所制備的勃勃生機,可以識別抗原的多個表位助力各業,親和性比單抗高,且無表位被掩蓋的顧慮提供有力支撐,多抗還可以放大低表達靶蛋白的信號應用。但多抗有時也會引入較高的背景信號,在缺乏參考資料的情況下品率,可以通過 Blast 制備多抗的抗原序列來確定是否存在可能干擾實驗的同源蛋白相貫通,另外多抗的不同制備批次間易存在差異不斷發展。
盡管雜交瘤細胞系生產的單抗可以在一段時間內保持穩(wěn)定的抗體性能,我們的 Active Motif 的科學家也采取多種措施來保證抗體質量自動化方案,如每次生產的抗體都會對其做嚴格質量檢測緊密協作;保證低傳代的雜交瘤在液氮中的保存量,杜絕高傳代雜交瘤生產抗體線上線下;縮短體外或動物體內培養(yǎng)的時間等等發揮重要作用。但不可避免的,雜交瘤細胞系在*培養(yǎng)后會產生返祖現象不分泌抗體或者分泌無意義輕重鏈數據顯示,降低抗體效價高質量,此時就會更換新的雜交瘤系。所以記得牢,如果您已經找到適用的單抗/多抗註入了新的力量,不妨為為發(fā)表文章/畢業(yè)多儲備兩支。如果實驗室需要*穩(wěn)定無批次差異的高品質抗體更多可能性,那么重組抗體會是一個很好的選擇去創新。
重組抗體:Active motif 的 AbFlex® 重組抗體,是通過獲得高親和性高特異性單抗的基因重要性,構建Active Motif的*的抗體表達載體進行表達生產又進了一步。它可以根據實驗需要靈活選擇抗體標記物和純化方式多種場景,性能穩(wěn)定多元化服務體系,*消除了批次間的差異,并且生產過程中不需要免疫動物擴大公共數據,這樣既避免了動物病原體的污染也減少了對實驗動物的傷害深度。
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