活體光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)技術與熒光(fluorescence)技術十大行動。生物發(fā)光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA領域，今天進一步提升，生物發(fā)光標記物可以標記到任何一種基因上協調機製，使對基因功能的全面細致研究成為現實重要的角色。而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP向好態勢，Cyt及dyes等)進行標記平臺建設，利用熒光蛋白在外源光源或是內源發(fā)光照射下被激發(fā)產生的熒光作為檢測信號服務機製。研究人員能夠利用一套非常靈敏的光學檢測儀器直接監(jiān)控活體生物體內的細胞活動和基因行為。
 

　　該技術可被廣泛應用于標記細胞或基因的示蹤及檢測使用；基因治療(gene therapy)在活體動物體內直接的觀察和檢測大幅拓展；基因組、蛋白組學更加堅強、藥學及生物技術在活體動物內的研究與時俱進；藥物及化學合成藥物的藥物代謝及毒理學監(jiān)測；食品菌落生長成像初步建立；皮膚醫(yī)學中皮膚疾病的體內成像綜合運用；法醫(yī)鑒定；微孔板成像的方法，例如：免疫分析實事求是、報告基因、基因探針和嗜菌作用分析等落到實處；熒光團的體內成像服務水平，例如：Alzheimer疾病研究中結合嗪的β-淀粉沉淀物分析；轉基因植物(transgenic plant)中通過報告基因對生理周期節(jié)奏的研究技術創新；凝膠成像分析等等處理方法。
 

　　實驗步驟
 

　　1. 用熒光色素DiD標記間充質干細胞
 

　　1) 先用*消化待標記材料，使之成為一定密度的懸浮液持續向好；
 

　　2) 從細胞培養(yǎng)箱中取出間充質干細胞活動上，吸取含原有培養(yǎng)基的細胞懸浮液進行標記；
 

　　3) 用10 ml Mg/Ca-free PBS (不含鈣鎂離子的磷酸緩沖液)清洗細胞進一步推進，吸去PBS導向作用，鈣鎂離子會影響*的活性，必須小心應用的選擇；
 

　　4) 加入預熱的0.05% *液十大行動，加液量以T75型瓶為例，每瓶加5ml背景下，確保瓶的表面被*覆蓋綜合措施；
 

　　5) 在細胞培養(yǎng)箱中37° C 孵育約 5 分鐘；
 

　　6) 然后在顯微鏡下確認細胞已經*分散基本情況，如果有細胞貼壁情況現場，輕拍若干次或延長孵育時間直至酶解消化*成功；
 

　　7) 加入等量含 10% FCS的培養(yǎng)基中和*力量；
 

　　8) 用移液器反復吸取幾次確保細胞均勻分散我有所應；
 

　　9) 然后移取細胞懸浮液至15ml 已滅菌的有蓋聚丙烯離心管中；
 

　　10) 400 RCF離心5 分鐘深入實施；
 

　　11) 小心移去上清液至關重要，不要擾動細胞發展空間；
 

　　12) 將細胞重新懸浮于DMEM 并進行計數；
 

　　13) 需要待標記細胞在無血清DMEM溶液中的密度應為1x106/ml 有所應；
 

　　14) 每ml細胞懸浮液加入5 μL DiD 染色液足了準備；
 

　　15) 用移液器將染色液與細胞懸浮液混合均勻；
 

　　16) 在6孔低附著性細胞板上37°C 孵育20分鐘著力提升；
 

　　17) 孵育*后移取細胞懸浮液至15ml 已滅菌的有蓋聚丙烯離心管中深刻內涵；
 

　　18) 400 RCF離心5 分鐘；
 

　　19) 小心移去染色液融合，不要擾動細胞交流等；
 

　　20) 用PBS清洗細胞，用移液器反復吸取幾次確保細胞均勻分散規劃；
 

　　21) 重復洗三次提高；
 

　　22) 細胞重新計數并用臺盼藍染色法檢測細胞活性；
 

　　23) 進行活細胞成像進入當下。
 

　　2. 用熒光色素ICG標記人胚胎干細胞
 

　　1) 必須先準備好*溶液(血容量紮實、心輸出量、肝功能測定劑)作為對照品新體系，然后使之與轉染試劑*(抗凝血作用)混合投入力度；
 

　　2) 測出1ml*溶液的活力，然后在100 μL DMSO中溶解ICG不難發現；
 

　　3) 向混合物中加入 400 μL Dulbecco的改良Eagles 培養(yǎng)基 (DMEM加10% 胎牛血清)貢獻法治，震蕩均勻，*溶液終濃度為2mg/ml發展需要；
 

　　4) 加入轉染試劑*攻堅克難，*作為對照品的載體，使之能夠有效進入細胞顯示；
 

　　5) 在300 μL ICG 和 300 μL 無血清Dulbecco改良 Eagles 培養(yǎng)基中混入 5 μL 硫酸*溶液流程，使之終濃度為 10mg/ml，勃勃生機；
 

　　6) 震蕩5分鐘使之形成復合物助力各業，標記溶液制備完畢；
 

　　7) 從 hESC 10mm Petri 培養(yǎng)皿中移去原有培養(yǎng)基提供有力支撐；
 

　　8) 加入5ml預熱的 DMEM應用；
 

　　9) 加入制備好的*/ICG 溶液， 37°C下孵育1h品率；
 

　　10) 孵育*后移去染色液相貫通；
 

　　11) 用5 ml PBS漂洗培養(yǎng)皿以清除染色液；
 

　　12) 移去 PBS 再加入 5ml 0.25 % *液，37°C下孵育5分鐘使之酶解集聚效應，適當震搖培養(yǎng)皿效果會更好集成；
 

　　13) 用移液器反復吸取幾次確保細胞均勻分散重要手段；
 

　　14) 加入等量含 10% KSR的培養(yǎng)基中和*互動講；
 

　　15) 然后移取細胞懸浮液至15ml 已滅菌的有蓋聚丙烯離心管中，400 RCF離心5 分鐘像一棵樹；
 

　　16) 在全培養(yǎng)基中懸浮細胞過程中；
 

　　17) 如果還有細胞團塊，可以移去原有培養(yǎng)基用10ml預熱的全ESC培養(yǎng)基重新懸浮細胞能運用，重復酶解再離心達到；
 

　　18) 在這一點上，鼠源飼喂細胞需從hESCs中分離不可缺少；
 

　　19) 然后將細胞懸浮液移至涂布瓊脂的10 cm 培養(yǎng)皿中蓬勃發展；
 

　　20) 37°C 孵育 45 分鐘，注意不要晃動培養(yǎng)皿積極回應，如此鼠源飼喂細胞會貼壁而干細胞保持懸钢匾?。?br /> 

　　21) 從Petri 培養(yǎng)皿中移出已標記的單細胞人胚胎干細胞懸浮液多種場景；
 

　　22) 細胞重新計數并用臺盼藍染色法檢測細胞活性多元化服務體系；
 

　　23) 進行活細胞成像。