抗體的結(jié)構(gòu)
 

　　抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白 (immunoglobulin,Ig)重要意義。Ig分五類基礎，即IgG、IgA的有效手段、IgM統籌推進、IgD和IgE方案。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為 IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成了解情況。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤纳钊?，?kappa;(kappa)和λ(Lambda )兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同重要的，這決定了它們的抗原性也不同開展研究。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu )鏈。 重鏈和輕鏈的 N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異相互融合，稱為可變區(qū)質生產力，分別用VH和VL表示。兩者構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合部位技術交流，只與相應(yīng)的抗原決定簇匹 配，發(fā)生特異性結(jié)合(見圖)拓展，是抗體專一性結(jié)合抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)創造更多。 IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區(qū)段，其中兩個相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片段(Fab)不斷進步。每個Fab都保存結(jié)合抗原的能力工藝技術，但只有一 個抗原結(jié)合位點，是單價的規模，與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀近年來。另一區(qū)段稱Fc段，無抗體活性發展目標奮鬥，但具有IgG*的抗原性通過活化。 IgG可被*分解為兩個片段，一個Fab雙體的特點，稱F(ab)2健康發展，能和兩個相同的抗原結(jié)合；另一片段類似Fc大數據，隨后被分解 成小分子多肽長效機製，無生物活性。 IgM是由五個單體組成的五聚體數字技術，含 10個重鏈和10個輕鏈奮戰不懈，具有10個抗原結(jié)合價，由于空間位置的影響措施，只表現(xiàn)為五個抗原結(jié)合價大大縮短。IgM分子量約為900000， IgG分子量約為150000更高要求。 機體被微生物感染后越來越重要的位置，先產(chǎn)生 IgM抗體新技術，然后產(chǎn)生IgG抗體。經(jīng)過一段時間順滑地配合，IgM抗體量逐漸減少而消失深入，而IgG抗體可長期存在，在疾病*后可持續(xù)數(shù)年 之久前沿技術。 IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性基礎。因此IgM抗體的測定，對某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價值多種方式。右圖為為甲型肝炎 病人血清中IgG抗體和IgM抗體出現(xiàn)的時間和水平對外開放。
 

　　抗原抗體反應(yīng)
 

　　1.可逆性
 

　　抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為： Ag+Ab→Ag·Ab 抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力深入交流研討，可以用平衡常數(shù)K表示： K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] Ag·Ab的解離程度與K值有關(guān)資料。高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固關註度，不易解離橫向協同。解離 后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，因此可用親和層析法來提純抗原或抗體敢於挑戰。在抗血清中不斷創新，特異性的IgG抗體僅占總IgG中 的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體讓人糾結，稱為親和層析純抗體規模，應(yīng)用于免疫測定中可得到更好的效果。
 

　　適比例
 

　　在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物(沉淀)的量見圖1-4基石之一。曲線的高峰部分是抗原抗體比例合適的范圍聯動，稱為等價帶(zone of equivalence)。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶共同努力。如果抗原或抗體極度過剩生產體系，則無沉淀物形成，在免疫測定中 稱為帶現(xiàn)象(zone phenomenon)很重要∧芰退?？贵w過量稱為前帶(prezone)，抗原地過量稱為后帶(postzone)異常狀況。在用免疫學(xué)方法測定抗 原時研究，應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量，否則測得的量會小于實際含量應用創新，甚至出現(xiàn)假陰性提高。
 

　　特異性
 

　　抗原抗體的結(jié)合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補關(guān)系的特性，所以抗原 抗體反應(yīng)具有高度的特異性交流。例如乙肝病毒中的表面抗原( HBsAg)基礎、e抗原(HBeAg)和核心抗體(HBcAg)，隨來源于同一病毒還不大，但僅與其相應(yīng)的抗體結(jié)合高產，而不與另外兩種抗體 反應(yīng)“l揮作用？乖贵w反應(yīng)的這種特異性使免疫測定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物(例如血清)中測定某一特定的物質(zhì)良好，而不需先分離待檢物 。 但是這種特異性也不是的銘記囑托。假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu)引領，在抗原抗體反應(yīng)中可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。例如：絨毛膜*( hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個亞單位組成示範，其結(jié)構(gòu)的不同處在β亞單位應用前景，而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫 動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體運行好，抗α-hCG抗體將與LH中的 α酶位發(fā)生交叉反應(yīng)動手能力。在臨床檢驗中，如用抗hCG抗血清作為ren娠診斷試劑檢定尿液中hCG意見征詢，只能用于hCG濃度較高的試驗，否則 婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)生交叉反應(yīng)大大提高。因此在作為早孕診斷(敏感度應(yīng)達到50mIu/mlhCG)的實際中必須 應(yīng)用只對hCG特異的抗β-hCG的必然要求，以避免與其它激素的交叉反應(yīng)的發(fā)生。
 

　　敏感性
 

　　在測定血清中某一物質(zhì)的含量時取得了一定進展，化學(xué)比色法的敏感度為 mg/ml水平完善好，酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿積極參與。標(biāo)記的免 疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍問題分析，達ng/ml水平。例如交流研討，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg更加完善，其敏感度可達0.1ng /ml。
 

　　標(biāo)記的免疫測定
 

　　如上所述建設應用，免疫測定是一種很敏感的測定方法支撐作用，抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達 5~10μg/ml動力，但在臨床檢驗中同時，某些待測物在標(biāo)本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法效高性。標(biāo)記的免疫測定是 將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標(biāo)記模式，通過測定標(biāo)記物來提高敏感度自動化。在放射免疫測定和酶免疫測定中，標(biāo)記物分別 為放射性核素和酶高品質，后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量不折不扣，敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測定中健康發展， 一般加入過量的標(biāo)記試劑以保證與待測物*反應(yīng)有效保障。以標(biāo)記抗體(Ab ※)檢測抗原(Ag)為例，反應(yīng)式如下： Ag+ Ab※ → AgAb>※+ Ab※
 

　　在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ 長效機製，如不將兩者分離而測定標(biāo)記物講實踐，測得的結(jié)果將為兩者之和。因此奮戰不懈，游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測定中的重要步驟改革創新。可采 用多種手段取得顯著成效，固相載體是其中之一新模式。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與標(biāo)記的抗原或抗體直接反應(yīng)不容忽視，結(jié)合的標(biāo)記物被固定在載 體上組織了，而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab ※除去說服力，結(jié)合標(biāo)記物的測定可在固相上進行搶抓機遇。
 

　　酶免疫測定
 

　　酶免疫測定(enzyme immunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可 不需進行游離的和結(jié)合的標(biāo)記物的分離而直接測定標(biāo)記物表示。例如在某種條件下全面闡釋，抗原抗體反應(yīng)后形成的酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物中的酶失去 其對底物作用的活力，因而測出的酶活力直接反映游離的酶標(biāo)記物競爭力所在。均相EIA在臨床檢驗中較少應(yīng)用引人註目。非均相EIA需*行游離的和 結(jié)合的標(biāo)記物的分離。如前所述溝通機製，固相載體可用作一種分離手段好宣講。這種固相酶免疫測定方法在1971年初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑 測定(enzyme linked immunosorbent assay)，簡稱ELISA領先水平，在國內(nèi)有譯作酶聯(lián)免疫吸附試驗的新產品，雖然含義不*確切，但已習(xí)用橋梁作用。