一構建、目的要求
1.掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法,并觀察其形態(tài)特征能力和水平。
2.掌握常用的霉菌制片方法
二覆蓋、基本原理
霉菌菌絲較粗大,細(xì)胞易收縮變形研究,而且孢子很容易飛散高效,所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片其特點(diǎn)是:(a)細(xì)胞不變形提高;(b)具有殺菌防腐作用機構,且不易干燥,能保持較長時(shí)間交流;(c)溶液本身呈藍(lán)色基礎,有一定染色效果。
霉菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)還不大,常用載玻片觀察高產,此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后用顯微鏡觀察發揮作用。此外良好,為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察單產提升。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性傳遞,將霉菌生長在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上,然后將長菌的玻璃紙剪取一小片勞動精神,貼放在載玻片上用顯微鏡觀察開展攻關合作。
三、器材
曲霉(Aspergillussp.)預下達,青霉(Penicillium sp.)的有效手段,根霉(Rhizopus sp.),毛霉(Mucor sp.)方案;
乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液關鍵技術,20%甘油,查氏培養(yǎng)基平板深入,馬鈴薯培養(yǎng)基技術研究;無菌吸管,載玻片開展研究,蓋玻片積極參與,U形棒,解剖刀培養,玻璃紙交流研討,濾紙等。
四形式、操作步驟
1.一般觀察法
于潔凈載玻片上建設應用,滴一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液,用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中日漸深入,再細(xì)心地將菌絲挑散開動力,然后小心地蓋上蓋玻片,注意不要產(chǎn)生氣泡豐富內涵。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察生產效率,必要時(shí)再換高倍鏡。
2.載玻片觀察法
(1)將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)適應性,再放上U形玻棒節點,其上放一潔凈的載玻片,然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端落地生根,蓋上皿蓋的特點,把數(shù)套(根據(jù)需要而定)如此裝置的培養(yǎng)皿疊起,包扎好有效保障,用1.05kg/cm2大數據,121.3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌,備用。
(2)將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中數字技術,待凝固后奮戰不懈,用無菌解剖刀切成0.5—1cm2的瓊脂塊,用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上措施,每片上放置2塊大大縮短。
(3)用滅菌的尖細(xì)接種針或裝有柄的縫衣針,取(肉眼方能看見的)一點(diǎn)霉菌孢子緊密相關,輕輕點(diǎn)在瓊脂塊的邊緣上更默契了,用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上,再蓋上皿蓋培訓。
(4)在培養(yǎng)皿的濾紙上不合理波動,加無菌的20%甘油數(shù)毫升,至濾紙濕潤即可停加分析。將培養(yǎng)皿置28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)一定時(shí)間后表示,取出載玻片置顯微鏡下觀察。
3.玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法
(1)向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水系統穩定性,洗下孢子拓展基地,制成孢子懸液。
(2)用無菌鑷子將已滅菌的實力增強、直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養(yǎng)基平板上。
(3)用1ml無菌吸管吸取0.2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上探索創新,并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻帶來全新智能。
(4)置28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)后,取出培養(yǎng)皿新產品,打開皿蓋去完善,用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開,再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上長遠所需,用顯微鏡觀察求索。
五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1.結(jié)果
繪圖說明你所觀察到的霉菌形態(tài)特征規模。
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