一培訓、 實(shí)驗(yàn)原理
大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌宣講手段。微生物接種的方法有很多重要工具，常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。
平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作配套設備，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面性能。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體對外開放，這就是菌落技術創新。
稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面資料，進(jìn)行培養(yǎng)廣泛應用。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞橫向協同，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落哪些領域。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />
1長遠所需、掌握用平板劃線法分離純化大腸桿菌的方法求索；
2、掌握用稀釋涂布平板法分離純化大腸桿菌的方法規模。
三穩定發展、儀器與用具
高壓滅菌鍋，超凈工作臺，接種環(huán)增持能力，培養(yǎng)皿共同努力，酒精燈，試管追求卓越，玻璃涂布器逐漸完善，pH試紙，微量可調(diào)移液器合理需求，恒溫培養(yǎng)箱是目前主流，大腸桿菌，微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)試劑盒
四高質量、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
稱取微生物培養(yǎng)試劑盒中的固體培養(yǎng)基6.4g加入200mL水中應用創新，加熱充分溶解(可按培養(yǎng)的微生物適合生長條件需要調(diào)節(jié)pH)，121℃高壓滅菌20min待用機構，可倒平板10個(gè)的特性。
稱取2g液體培養(yǎng)基加100mL蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0基礎，121℃高壓滅菌20min提供堅實支撐，冷卻后在超凈臺接入100μL大腸桿菌菌種，恒溫振蕩器37℃震蕩培養(yǎng)12小時(shí)高產，用滅菌離心管每組分裝1mL實(shí)驗(yàn)備用
五信息化技術、實(shí)驗(yàn)步驟
1、倒平板操作：
×己?、艑邕^菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上逐步顯現，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手打開封口膜引領。
∽詣踊b置、朴沂帜缅F形瓶，使瓶口迅速通過火焰應用前景。
「哔|量、怯米笫值哪粗负褪持笇⑴囵B(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約20mL)倒入培養(yǎng)皿激發創作，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋前景。
⑷等待平板冷卻凝固增幅最大，大約需要5～10min共享應用。然后，將平板倒過來放置標準，使皿蓋在下示範推廣，皿底在上。
2、平板劃線操作：
》e極參與、艑⒔臃N環(huán)放在火焰上灼燒問題分析，直到接種環(huán)燒紅培養；
〗涣餮杏?、圃诨鹧媾岳鋮s接種環(huán)，并打開試管帽形式；
〗ㄔO應用、菍⒃嚬芸谕ㄟ^火焰；
∪諠u深入、葘⒁牙鋮s的接種環(huán)深入菌液中動力，沾取大腸桿菌液。
』邮叫v、蓪⒃嚬芸谕ㄟ^火焰效高性，并蓋上試管冒。
∽詣踊?、首笫謱⒚笊w打開一條縫隙提升，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速深入平板內(nèi)，劃三到五條平行線不折不扣，蓋上皿蓋支撐能力。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。
「咝Ю?、俗茻臃N環(huán)特征更加明顯，待其冷卻后，從一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線數字化。重復(fù)以上操作方便，在三、四各領域、五區(qū)域內(nèi)劃線知識和技能。注意不要將后一區(qū)的劃線與一區(qū)相連。
3新模式、系列稀釋操作：
崿F、艑⒎謩e盛有9mL水的5支試管滅菌，并按101～105的順序編號組織了。
》阵w系、朴靡埔汗芪?mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中搶抓機遇。吹吸三次或震蕩分析，使菌液與水充分混勻。
⑶從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液非常激烈，注入102倍稀釋的試管中競爭力所在，重復(fù)第2步的操作。依次類推領域，直到完成后一只試管的稀釋溝通機製。
4、涂布平板操作：
≡]入新的動力、庞没鹧孀茻坎计鳒缇I先水平，然后冷卻8～10s。
‰p重提升、迫∩倭烤?100μL)戰略布局，滴加到培養(yǎng)基表面。
”憩F明顯更佳、怯猛坎计鲗⒕壕鶆虻赝坎荚谂囵B(yǎng)基表面狀態。
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