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　　雜交瘤克隆化一般是指將抗體陽性孔進(jìn)行克隆化。因?yàn)榻?jīng)過HAT篩選后的雜交瘤克隆不能保證一個(gè)孔內(nèi)只有一個(gè)克隆深刻認識。在實(shí)際工作中核心技術，可能會(huì)有數(shù)個(gè)甚至更多的克隆，可能包括抗體分泌細(xì)胞深入、抗體非分泌細(xì)胞效高、所需要的抗體（特異性抗體）分泌細(xì)胞和其它無關(guān)抗體的分泌細(xì)胞。要想將這些細(xì)胞彼此分開就需要克隆化基礎⌒阅?？寺』脑瓌t是，對(duì)于檢測(cè)抗體陽性的雜交克隆盡早進(jìn)行克隆化對外開放，否則抗體分泌的細(xì)胞會(huì)被抗體非分泌的細(xì)胞所抑制技術創新，因?yàn)榭贵w非分泌細(xì)胞的生長速度比抗體分泌的細(xì)胞生長速度快，二者競爭的結(jié)果會(huì)使抗體分泌的細(xì)胞丟失資料。即使克隆化過的雜交瘤細(xì)胞也需要定期的再克隆廣泛應用，以防止雜交瘤細(xì)胞的突變或染色體丟失，從而喪失產(chǎn)生抗體的能力橫向協同。

　　克隆化的方法很多組合運用，常用的是有限稀釋法和軟瓊脂平板法。

　　1．有限稀釋法克隆

　∮y而上。?）克隆前1天制備飼養(yǎng)細(xì)胞層（同細(xì)胞融合）積極。

　　2）將要克隆的雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)孔內(nèi)輕輕吹干，計(jì)數(shù)。

　‘a業。?）調(diào)整細(xì)胞為3～10個(gè)細(xì)胞/ml滿意度。

　　（4）取頭天準(zhǔn)備的飼養(yǎng)細(xì)胞層的細(xì)胞培養(yǎng)板可持續，每孔加入稀釋細(xì)胞100μl主要抓手。孵育于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中 構建。

　撔驴萍?。?）在第7天換液，以后每2～3天換液1次共創輝煌。

　【哂兄匾饬x。?）8～9天可見 細(xì)胞克隆形成，及時(shí)檢測(cè)抗體活性大部分。

　姶蟮墓δ?。?）將陽性孔的細(xì)胞移至24孔板中擴(kuò)大培養(yǎng)。

　〗鉀Q方案。?）每個(gè)克隆應(yīng)盡快凍存的特性。

　　2．軟瓊脂培養(yǎng)法克隆

　　（1）軟瓊脂的配制：含有20%NCS（小牛血清）的2倍濃縮的RPMI1640基礎。

　√峁﹫詫嵵?、?%瓊脂水溶液：高壓滅菌，42℃預(yù)熱高產。

　『唵位?、?.5%瓊脂：由1份1%瓊脂加1份含20%小牛血清的2倍濃縮的RPMI1640配制而成。置42℃保溫明確了方向。

　　（2）用上述0.5%瓊脂液（含有飼養(yǎng)細(xì)胞）15ml傾注于直徑為9cm的平皿中勇探新路，在室溫中待凝固后作為基底層備用單產提升。

　　（3）按100/ml試驗，500/ml或5000/ml等濃度配制需克隆的細(xì)胞懸液勞動精神。

　　（4）1ml 0.5%瓊脂液（42℃預(yù)熱）在室溫中分別與1ml不同濃度的細(xì)胞懸液相混合製度保障。

　☆A下達。?）混勻后立傾注于瓊脂基底層上，在室溫中10min統籌推進，使其凝固方案，孵育于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中。

　∩钊?。?）4～5天 后即可見針尖大小白色克隆技術研究，7～10天后，直接移種至含飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔中進(jìn)行培養(yǎng)開展研究。

　∽藙?。?）檢測(cè)抗體，擴(kuò)大培養(yǎng)首要任務，必要是地再克隆化綠色化。