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厭氧菌的培養(yǎng)

閱讀:1615      發(fā)布時(shí)間:2019-5-7
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核心提示:

       厭氧菌(anaerobicbacteria)是一類在無氧條件下比在有氧環(huán)境中生長好的細(xì)菌成就,而不能在空氣(18%氧氣)和(或)10%二氧化碳濃度厭氧培養(yǎng)箱下的固體培養(yǎng)基表面生長的細(xì)菌。這類細(xì)菌缺乏完整的代謝酶體系關註,其能量代謝以無氧發(fā)酵的方式進(jìn)行研究進展。厭氧菌是人體正常菌群的組成部分,廣泛存在于人體皮膚和腔道的深部黏膜表面連日來,在組織缺血快速融入、壞死,或者需氧菌感染的情況下系統,導(dǎo)致局部組織的氧濃度降低增強,才發(fā)生厭氧菌感染。

一交流等、厭氧菌標(biāo)本的送檢方法與處理
       標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后更加廣闊,應(yīng)在20~30min內(nèi)處理完畢,遲不超過2h提高,以防止標(biāo)本中兼性厭氧菌過度繁殖而抑制厭氧菌的生長可以使用。如不能及時(shí)接種,可將標(biāo)本置室溫保存(一般認(rèn)為紮實,冷藏對(duì)某些厭氧菌有害效高化,而且在低溫時(shí)氧的溶解度較高)。 
1)針筒運(yùn)送:一般用無菌針筒抽取標(biāo)本后進行培訓,排盡空氣發展機遇,針頭插入無菌橡皮塞,以隔絕空氣法治力量,立即送檢全技術方案。這種方法多用于液體標(biāo)本的運(yùn)送,如血液共享、膿液信息化、胸腹水、關(guān)節(jié)液等醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理生動。 
2)無菌小瓶運(yùn)送:一般采用無菌的青霉素小瓶新型儲能,瓶內(nèi)加一定量的培養(yǎng)基和少量氧化還原指示劑,用橡皮蓋加鋁蓋固定密封新品技,排除瓶內(nèi)空氣範圍,充以C02氣體。同時(shí)先觀察瓶內(nèi)氧化還原指示劑的顏色紮實做,以判斷瓶內(nèi)是否為無氧環(huán)境空間廣闊,如合格將用*將液體標(biāo)本注入瓶中即可。 
3)棉拭子運(yùn)送:一般不采用棉拭子運(yùn)送臺上與臺下,如果使用該方法用的舒心,一定使用特制運(yùn)送培養(yǎng)基技術發展,確保無氧環(huán)境,確保不被污染集成,確敝匾侄??焖偎蜋z。 
4)厭氧罐或厭氧袋運(yùn)送:將厭氧罐或厭氧袋內(nèi)裝入可有效消耗氧氣的物質(zhì)穩定性,確保無氧環(huán)境像一棵樹。該方法一般用于運(yùn)送較大的組織塊或床邊接種的培養(yǎng)皿等。

二更高效、厭氧菌的分離培養(yǎng)
       厭氧菌的分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個(gè)階段全面協議,其中初代培養(yǎng)相對(duì)比較困難重要部署,關(guān)鍵的問題就是厭氧環(huán)境和培養(yǎng)基的選擇具體而言。初代培養(yǎng)的一般原則是: 
1)先將標(biāo)本涂片染色直接鏡檢,指導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇智慧與合力。 
2)盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基喜愛。 
3)多選1~2種覆蓋面不同的選擇性培養(yǎng)基。 
4)盡量保證培養(yǎng)基新鮮開放要求。 
5)要考慮到微需氧菌存在的可能向好態勢。

1.選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基接種:應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基; 
(1)培養(yǎng)基的使用服務機製,應(yīng)注意下列各點(diǎn): 
1)盡量使用新鮮培養(yǎng)基貢獻力量,2~4h內(nèi)用完; 
2)應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基大幅拓展,預(yù)還原24~48h更好發行速度; 
3)可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基(用前于培養(yǎng)基中加入還原劑,如L-半胱氨酸與時俱進、硫乙醇酸鈉性能、維生素C及葡萄糖等,盡可能使預(yù)還原劑處于還原狀態(tài))綜合運用; 
4)液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min供給,以驅(qū)除溶解氧,并迅速冷卻實事求是,立即接種進行探討; 
5)培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應(yīng)營養(yǎng)豐富,并加有還原劑與生長因子(血清責任製、維生素K十分落實、氯化血紅素、聚山梨酯-80等)促進善治。

(2)培養(yǎng)基的選擇:初次培養(yǎng)一般都使用選擇培養(yǎng)基和非選擇培養(yǎng)基擴大。 
1)非選擇培養(yǎng)基:本培養(yǎng)基使分離的厭氧菌不被抑制多樣性,幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂(BHI)新格局、布氏瓊脂(BR)明顯、胰豆胨肝粉瓊脂(GAM)、胰胨酵母瓊脂(EG)顯示、CDC厭氧血瓊脂等創新為先。 
2)選擇培養(yǎng)基:為有目的選擇常見厭氧菌株,以便盡快確定厭氧的種類科普活動。

2.每份標(biāo)本至少接種3個(gè)血平板創新延展,分別置于有氧,無氧及5%~10à2環(huán)境中培養(yǎng)長期間,以便正確地培養(yǎng)出病原菌基本情況,從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌高端化、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類力量。

3.厭氧培養(yǎng)法
(1)厭氧罐培養(yǎng)法。
(2)氣袋法提單產。
(3)氣體噴射法:又稱轉(zhuǎn)管法深入實施。
(4)厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)法:是迄今厭氧菌培養(yǎng)的好儀器之一。
(5)其他培養(yǎng)法:平板焦性沒食子酸法發展空間;生物耗氧法效果;高層瓊脂培養(yǎng)法。

4.厭氧狀態(tài)的指示:美藍(lán)和刃天青足了準備。無氧時(shí)均呈白色合作關系,有氧時(shí)美藍(lán)呈藍(lán)色,刃天青呈粉紅色系統。

5.分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因:
①培養(yǎng)前未直接涂片和染色鏡檢增強;
②標(biāo)本在空氣中放置太久或接種的操作時(shí)間過長;
③未用新鮮配制的培養(yǎng)基適應能力;
④未用選擇培養(yǎng)基更優美;
⑤培養(yǎng)基未加必要的補(bǔ)充物質(zhì);
⑥初代培養(yǎng)應(yīng)用了硫乙醇酸鈉作為厭氧菌培養(yǎng)基防控;
⑦無合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣成效與經驗;
⑧催化劑失活;
⑨培養(yǎng)時(shí)間不足堅實基礎;
⑩厭氧菌的鑒定材料有問題稍有不慎。

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