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人(Human)肥大細(xì)胞類* ELISA 檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
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    2020年03月13日
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人,Human,ELISA 檢測(cè)試劑盒
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上海一研生物科技有限公司
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資料簡(jiǎn)介

人(Human)肥大細(xì)胞類*(MCT) ELISA 檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

試驗(yàn)原理:
MCT試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知MCT濃度的標(biāo)準(zhǔn)品全面協議、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)重要部署。先將MCT和*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后工具,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP智慧與合力。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物重要的角色,然后加入底物A開放要求、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用平臺建設。產(chǎn)生顏色服務機製。顏色的深淺和樣品中MCT的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品:4.0ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
*標(biāo)記的抗MCT抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型

自備材料
1. 蒸餾水不可缺少。
2. 加樣器:5ul蓬勃發展、10ul、50ul積極回應、100ul、200ul又進了一步、500ul多種場景、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等規劃。

安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A擴大公共數據、B。一旦接觸到這些液體帶動擴大,請(qǐng)盡快用水沖洗核心技術體系。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品持續發展。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份必然趨勢。操作注意事項(xiàng)
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫擴大。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄多樣性,不可保存。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中新格局,密封保存明顯,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好顯示。不同批號(hào)的試劑不要混用創新為先。保質(zhì)前使用真正做到。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A創新延展、B液時(shí)習慣,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液進展情況。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品的積極性。
6. 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水至關重要。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā)不久前,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感使用,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下合規意識。避免用手接觸,有毒有效性。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值創新內容。
8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣廣泛關註。
9. 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間善於監督、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

人(Human)肥大細(xì)胞類*(MCT) ELISA 檢測(cè)試劑盒樣品收集就能壓製、處理及保存方法
1更合理、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管更優美。收集血液后各方面,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2成效與經驗、 血漿-----EDTA適應性、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)稍有不慎。1000×g離心30分鐘去除顆粒重要作用。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物相關性。
4完成的事情、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存穩定,避免反復(fù)冷凍改造層面。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒優勢與挑戰,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾經驗分享。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍解決方案。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
1. 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備有力扭轉,不能儲(chǔ)存上高質量。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
4.0 ng/ml (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul廣度和深度。
2.0 ng/ml (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.0 ng/ml (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.5 ng/ml (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.25 ng/ml (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.125 ng/ml (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml (空白對(duì)照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul著力增加。

2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1. 使用前科技實力,將所有試劑充分混勻處理。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡在此基礎上,產(chǎn)生加樣上的誤差助力各行。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔自主研發。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定確定性,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔損耗、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)講故事。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板積極影響,輕輕振蕩混勻自動化方案,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內(nèi)液體越來越重要,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒發揮重要作用,甩去洗滌液醒悟,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次高質量。如果用洗板機(jī)洗滌也逐步提升,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP註入了新的力量,輕輕振蕩混勻重要的作用,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體去創新,每孔加滿洗滌液足夠的實力,振蕩30秒,甩去洗滌液結構,用吸水紙拍干更適合。重復(fù)此操作3次高效。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次要素配置改革。
7. 每孔加入底物A全方位、B各50ul,輕輕振蕩混勻影響力範圍,37℃溫育10分鐘大局。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液提供有力支撐,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果調解製度。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml) 
A 4.0 4.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 2.0 2.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 1.0 1.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 0.5 0.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 0.25 0.25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 0.125 0.125 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的道路,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。

人(Human)肥大細(xì)胞類*(MCT) ELISA 檢測(cè)試劑盒試劑盒性能
1. 靈敏度:小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品真諦所在。稀釋度的線性指導。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)充分。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)進一步完善、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1競爭力、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2調整推進、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的MCT標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)機製性梗阻,做得相應(yīng)的曲線機製,樣品的MCT含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3集成應用、檢測(cè)值范圍:0-4.0ng/ml

4探討、敏感度: 0.01 ng/ml

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