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沒有蛋白質(zhì)就沒有生命
可見更加廣闊,蛋白質(zhì)對人體的重要性損耗。
蛋白質(zhì)是組成人體一切細(xì)胞、組織的重要成分,
機(jī)體所有重要的組成部分都需要有蛋白質(zhì)的參與性能穩定。
一般說面向,蛋白質(zhì)約占人體全部質(zhì)量的18%,
重要的還是其與生命現(xiàn)象有關(guān)研學體驗。
成人每天的蛋白質(zhì)代謝情況
人體每天需要從食物中攝取正常值的蛋白質(zhì)建設項目,
維持身體正常機(jī)制的運(yùn)行。
蛋白質(zhì)常在體液或等滲緩沖液中再懸浮落實落細。然而講道理,在這種高導(dǎo)電性溶劑上用電泳光散射(ELS)測量zeta電位可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生過量熱量,進(jìn)而造成樣品降解和電極損傷技術先進。本文中,我們使用穩(wěn)定且可重復(fù)使用的Univette樣品池和Litesizer™500來測量溶解在等滲緩沖液中的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶菌酶的zeta電位延伸。由于cmPALS技術(shù)和蛋白模式認為,該模式可以使測量過程短暫中斷,使樣品冷卻下來新趨勢,能夠在不造成電極損傷的情況下獲得高重復(fù)性的zeta電位測量結(jié)果反應能力。
簡介
Zeta電位與粒子間斥力有關(guān),通常表征粒子懸浮液特性必需測量zeta電位學習。雖然很多物質(zhì)可以溶解或分散在去離子水中結構重塑,但有些粒子需要分散在高導(dǎo)電性的溶劑中才能保持其結(jié)構(gòu),不會(huì)降解應用優勢。這在生物樣品中尤其常見高質量發展,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)、生物醫(yī)學(xué)聚合物和細(xì)胞必須溶解在緩沖液或等滲緩沖液中高效節能。
利用電泳光散射(ELS)來測量zeta電位影響力範圍,這意味著在樣品上應(yīng)用了電場。這種測量技術(shù)的常見弊端是所謂的焦耳熱新創新即將到來,即電流通過導(dǎo)體(樣品)會(huì)產(chǎn)生熱量邁出了重要的一步。樣品的電導(dǎo)率越高,產(chǎn)生的熱量越多設施,這可能會(huì)導(dǎo)致樣品降解和電極損傷需求。這個(gè)問題對于生物樣品來說更為嚴(yán)重,因?yàn)樯飿悠沸枰邔?dǎo)電性的溶劑組合運用,并且對熱解非常敏感更讓我明白了。
因此,對于這樣的樣品積極,關(guān)鍵是要保持盡可能低的電流充分,并使用盡可能短的測試時(shí)間。Anton Paar的Litesizer™500,*的cmPALS技術(shù)可以在較低的電壓和較短的測量時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定靈敏的zeta電位測量關註度,從而降低敏感樣品的應(yīng)力橫向協同。此外,用戶可以激活一個(gè)稱為“蛋白模式”的軟件功能敢於挑戰,它會(huì)在測量zeta電位時(shí)引入短暫的中斷不斷創新,從而使樣品冷卻下來。
Univette是一種可重復(fù)使用的樣品池提供了遵循,可用于在高導(dǎo)電性或有機(jī)溶劑中測量zeta電位參與水平,它足夠堅(jiān)固,可以承受這種條件服務效率,并且不會(huì)造成電極損傷明確相關要求。
本文我們演示了Litesizer™500和Univette的聯(lián)用性能,即使用Kalliope™的蛋白模式來測量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶菌酶在高導(dǎo)電性溶劑中的zeta電位統籌發展。
實(shí)驗(yàn)方法
用卵清蛋白(Sigma-Aldrich)制備了兩種不同的溶菌酶溶液:
-
0.1 mg/mL深化涉外,溶于10 mM BisTris 緩沖液 (Carl Roth)和50 mM NaCl (J.T. Baker) 1:1的混合物中。
-
1.0 mg/mL生產製造,溶于磷酸鹽緩沖液(PBS開展試點,Sigma-Aldrich)中。
向Univette石英樣品池中加入900 μL樣品共同。Di一次測量的平衡時(shí)間設(shè)置為2分鐘推進一步,連續(xù)測量30秒。每個(gè)溶液測試3個(gè)獨(dú)立樣本簡單化,每個(gè)樣本重復(fù)4次力度,共測試12次。表1總結(jié)了測量的輸入?yún)?shù)系統性。
樣品濃度 | 0.1 mg/ml | 1 mg/ml |
溶劑 | 10mMBisTris 50mMNaCl (BisTris/NaCl) 1:1 混合溶液 | 磷酸緩沖液(PBS) |
電壓 | 5V | 3V |
運(yùn)行次數(shù) | 20 | 20 |
重復(fù)次數(shù) | 4 | 4 |
蛋白模式 | 是 | 是 |
表1:實(shí)驗(yàn)設(shè)置
Kalliope™軟件中的蛋白模式允許樣品在運(yùn)行時(shí)冷卻善謀新篇,從而減少焦耳熱的影響。
結(jié)果與討論
在BisTris/NaCl中制備的0.1 mg/mL樣品的平均電導(dǎo)率為6 mS/cm便利性,zeta電位為自動(dòng)測量模式(表2)方法。該溶液的平均zeta電位為12 mV,如表2所示提供有力支撐,如圖1所示切實把製度。12次測量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于5%。
樣品編號(hào) | 平均Zeta 電位[mV] | 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差[%] | 電導(dǎo)率[mS/cm] |
1 | 12.3 | 3.64 | 6.069 |
2 | 12.1 | 6.09 | 6.039 |
3 | 12.0 | 4.38 | 6.024 |
1-3 | 12.1 | 4.57 | 6.044 |
表2:0.1 mg/mL溶菌酶在BisTris/NaCl中溶解的3個(gè)樣品的Zeta電位結(jié)果逐步顯現。每個(gè)值代表4個(gè)測量值的平均值
圖1:0.1 mg/mL溶菌酶在BisTris/NaCl中的zeta電位分布圖
PBS配制的1 mg /mL溶液的zeta電位值為9 mV銘記囑托,如表3所示,如圖2所示自動化裝置。然而示範,該溶液的平均電導(dǎo)率明顯高于BisTris/NaCl (29.4 mS/cm vs. 6 mS/cm)應用前景。
盡管如此,測量值間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差是令人滿意的運行好,平均值為7.2%(表3)首次,遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于ISO標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定的大可接受重復(fù)性10%,這表明ELS不會(huì)導(dǎo)致樣品顯著的降解部署安排。
經(jīng)過12次測量后對Univette的鈀電極進(jìn)行目測檢查搖籃,也表明這些電極沒有受到任何可見的損傷(未顯示)。
樣品編號(hào) | 平均Zeta 電位[mV] | 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差[%] | 電導(dǎo)率[mS/cm] |
1 | 9.5 | 5.8 | 30.78 |
2 | 8.8 | 4.4 | 28.92 |
3 | 8.8 | 9.44 | 28.50 |
1-3 | 9.0 | 7.19 | 29.40 |
表3:溶解于PBS的3個(gè)溶菌酶樣品的Zeta電位結(jié)果推廣開來。每個(gè)值為4個(gè)測量值的平均值
圖2:PBS中1mg /mL溶菌酶的zeta電位分布圖
結(jié)論
從實(shí)驗(yàn)中推動,證明了在高導(dǎo)電性溶劑中使用Litesizer™500和Univette可以實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的高重復(fù)性zeta電位測量。cmPALS技術(shù)可以在較低的電壓和較短的測量時(shí)間內(nèi)測量zeta電位資源配置,大大降低了施加在樣品上的應(yīng)力信息。這使得即使在低濃度(0.1 mg/ml)和高導(dǎo)電性蛋白樣品中也可以進(jìn)行ELS測量。此外大力發展,Kalliope™的蛋白模式在ELS測試期間限制了焦耳熱豐富內涵,進(jìn)一步有助于樣品和樣品池的保存。
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