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古朵實(shí)驗(yàn):把好電鏡制樣后一道關(guān)口——染色

來源: 上海古朵生物科技有限公司    2020年04月09日 10:38  
  “七分制樣大型,三分電鏡”滿意度,這是電鏡人常掛在嘴邊的一句話。電鏡后的結(jié)果好不好可持續,很大程度上取決于樣品制備。樣品制備的后一步體製,就是染色構建。
 
  染色,是為了提高樣品在電鏡下的反差能力和水平。圖像的反差通常來源于樣品對(duì)電子束的散射能力覆蓋,而它的散射能力則取決于原子組成。
 
  原子序數(shù)越高研究,電子密度越高高效,散射電子能力越強(qiáng),電鏡下顯黑色提高;
 
  原子序數(shù)越低機構,電子密度越低,散射電子能力越弱交流,電鏡下顯白色基礎。
 
  生物樣品主要由 C、H還不大、O高產、N、P發揮作用、S 等低原子序數(shù)的元素組成良好,不足以形成足夠的反差。若利用重金屬離子對(duì)不同細(xì)胞結(jié)構(gòu)的結(jié)合能力不同銘記囑托,使各細(xì)胞結(jié)構(gòu)對(duì)電子產(chǎn)生不同散射程度引領,則可以增強(qiáng)樣品的反差。
 
常用的染色劑有醋酸鈾和檸檬酸鉛(pH 值在 11 左右)示範。
 
  醋酸雙氧鈾:以提高核酸勞動精神、蛋白質(zhì)和結(jié)締組織纖維的反差為主。
 
  檸檬酸鉛:對(duì)各種組織結(jié)構(gòu)都有廣泛的親和作用製度保障,尤其是細(xì)胞膜系統(tǒng)及脂類物質(zhì)預下達,對(duì)不能被鋨酸染色的糖原更具有染色作用。
 
  結(jié)合鈾和鉛不同的染色特性統籌推進,目前超薄切片染色大多都是將兩種試劑結(jié)合互補(bǔ)方案,雙重染色。即先用醋酸鈾染色后了解情況,再用檸檬酸鉛深入,以獲得滿意的染色效果技術研究。
 
  染色方法主要有兩種:
 
  組織塊染色:在脫水至 70%乙醇或bin酮時(shí),將組織塊放在用 70%乙醇或bin酮配制的飽和醋酸鈾溶液中開展研究,染色時(shí)間 2 小時(shí)以上姿勢,或在冰箱中過夜。切片后無需鈾染培養,直接檸檬酸鉛染色交流研討。
 
  切片染色:對(duì)載網(wǎng)上的超薄切片進(jìn)行染色,通常為雙染色形式,即*行醋酸鈾溶液染色建設應用,一般 10-30min,雙蒸水清洗后再進(jìn)行檸檬酸鉛染色日漸深入,一般 5-15min動力,鉛染后雙蒸水清洗。染色方法如下:
 
  剪一片封口膜互動式宣講,鋪在桌面上效高性,使用時(shí)揭開保護(hù)層,滴數(shù)滴染液于封口膜上自動化,用鑷子夾住載網(wǎng)的邊緣節點,把貼有切片的一面朝下,使載網(wǎng)浮在液滴上落地生根,蓋上培養(yǎng)皿的特點,染色 10-30min。染色時(shí)盡可能避光有效保障。載網(wǎng)從染液中取出后大數據,必須盡快用雙蒸水清洗干凈。在染色過程中講實踐,鉛染液容易與空氣中的二氧化碳結(jié)合形成碳酸鉛顆粒數字技術,而污染切片。因此市場開拓,在保存和使用染液時(shí)措施,要盡量減少與空氣的接觸。為防止鉛沉淀污染要落實好,可在培養(yǎng)皿內(nèi)放置少許氫氧化na緊密相關,以吸收空氣中的二氧化碳。
 
  另一種方法是先進技術,使用商業(yè)化的染色硅膠板培訓,多為圓形,用鑷子夾住載網(wǎng)邊緣,將其插在硅膠板縫隙中分析,在載網(wǎng)兩邊滴加染液表示,蓋上培養(yǎng)皿,清洗時(shí)非常激烈,可直接用洗瓶沖洗多次即可競爭力所在。

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