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掃描電子顯微鏡(SEM)是1965年發(fā)明的較現(xiàn)代的細(xì)胞生物學(xué)研究工具,主要是利用二次電子信號(hào)成像來觀察樣品的表面形態(tài)情況正常,即用極狹窄的電子束去掃描樣品行業分類,通過電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應(yīng),其中主要是樣品的二次電子發(fā)射提高鍛煉。
二次電子能夠產(chǎn)生樣品表面放大的形貌像發展邏輯,這個(gè)像是在樣品被掃描時(shí)按時(shí)序建立起來的,即使用逐點(diǎn)成像的方法獲得放大像有所提升。
掃描電子顯微鏡樣品制備比透射電鏡樣品制備簡(jiǎn)單聽得進,不需要包埋和切片。掃描電子顯微鏡樣品的制備先進水平,必須滿足以下要求:
1.保持完好的組織和細(xì)胞形態(tài)更多可能性;
2.充分暴露要觀察的部位;
3.良好的導(dǎo)電性和較高的二次電子產(chǎn)額足夠的實力;
4.保持充分干燥的狀態(tài)。
某些含水量低且不易變形的生物材料結構,可以不經(jīng)固定和干燥而在較低加速電壓下直接觀察更適合,如動(dòng)物毛發(fā)、昆蟲溝通協調、植物種子要素配置改革、花粉等,但圖象質(zhì)量差保障性,而且觀察和拍攝照片時(shí)須盡可能迅速影響力範圍。對(duì)大多數(shù)的生物材料,則應(yīng)首先采用化學(xué)或物理方法固定新創新即將到來、脫水和干燥邁出了重要的一步,然后噴鍍碳與金屬以提高材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額。
化學(xué)方法制備樣品
化學(xué)方法制備樣品的程序通常是:清洗設施、化學(xué)固定需求、干燥、噴鍍金屬組合運用。
1.清洗:某些生物材料表面常附血液更讓我明白了、細(xì)胞碎片迎難而上、消化道內(nèi)的食物殘?jiān)⒓?xì)菌探索、淋巴液及粘液等異物堅持先行,掩蓋著要觀察的部位,因而滿意度,需要在固定之前用生理鹽水或等滲緩沖液等把附著物清洗干凈情況較常見。亦可用5%碳酸鈉沖洗或酶消化法去除這些異物。
2.固定:通常采用醛類(主要是戊二醛和多聚甲醛)與四氧化鋨雙固定機製性梗阻,也可用四氧化鋨單固定機製。四氧化鋨固定不僅可良好地保存組織細(xì)胞結(jié)構(gòu),而且能增加材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額集成應用,提高掃描電子顯微圖象的質(zhì)量探討。這對(duì)高分辨掃描電子顯微術(shù)是重要的。為增強(qiáng)這種效果高效流通,可用四氧化鋨-單寧酸或是四氧化鋨-珠叉二胼等反復(fù)處理材料調解製度,使其結(jié)合更多的重金屬鋨,這就是導(dǎo)電染色功能。
3.干燥:固定后通常采用臨界點(diǎn)干燥法應用的因素之一。其原理是:適當(dāng)選擇溫度和壓力,使液體達(dá)到臨界狀態(tài)(液態(tài)和氣相間界面消失)預期,從而避免在干燥過程中由水的表面張力所造成的樣品變形敢於監督。對(duì)含水生物材料直接進(jìn)行臨界點(diǎn)干燥時(shí),水的臨界溫度和壓力不能過高(37.4℃結構,218帕)重要的作用。通常用乙醇或丙酮等使材料脫水,再用一種中間介質(zhì)簡單化,如醋酸戊酯力度,置換脫水劑,然后在臨界點(diǎn)干燥器中用液體或固體二氧化碳系統性、氟利昂13以及一氧化二氮等置換劑置換中間介質(zhì)勇探新路,進(jìn)行臨界干燥。
4.噴鍍金屬:將干燥的樣品用導(dǎo)電性好的粘合劑或其他粘合劑粘在金屬樣品臺(tái)上傳遞,然后放在真空蒸發(fā)器中噴鍍一層50~300埃厚的金屬膜試驗,以提高樣品的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額,改善圖象質(zhì)量開展攻關合作,并且防止樣品受熱和輻射損傷切實把製度。如果采用離子濺射鍍膜機(jī)噴鍍金屬,可獲得均勻的細(xì)顆粒薄金屬鍍層,提高掃描電子圖象的質(zhì)量進行部署。
冷凍方法制備樣品
低溫掃描電子顯微術(shù)是20世紀(jì)80年代迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用的方法責任。它包括生物樣品的冷凍固定、冷凍干燥保護好、冷凍割斷和冷凍含水樣品的掃描電子顯微術(shù)等組建。
1.冷凍固定:將生物材料投入低溫的致冷劑中,如液氦特點、液氮深刻變革、液體氟利昂及丙烷等『椭C共生?焖倮鋬隹墒股锝M織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成接近于生活狀態(tài)質生產力。被冷凍固定的生物樣品,可以在低溫條件下轉(zhuǎn)移到具有低溫樣品臺(tái)的掃描電子顯微鏡中直接觀察無需進(jìn)一步處理或僅在冷凍樣品表面噴鍍一薄層金屬技術交流。這種方法不僅快速簡(jiǎn)便先進的解決方案,而且可以排除由于干燥法造成收縮的假象,特別適合于研究含水量很高的生物材料創造更多。
2.冷凍干燥:生物樣品經(jīng)冷凍固定后宣講活動,其中的水分凍結(jié)成冰,表面張力消失工藝技術;再將冷凍樣品放于真空中效率,使冰漸漸升華為水蒸氣。這樣獲得的干燥樣品在一定程度上避免了表面張力造成的形態(tài)改變近年來。
二次電子能夠產(chǎn)生樣品表面放大的形貌像發展邏輯,這個(gè)像是在樣品被掃描時(shí)按時(shí)序建立起來的,即使用逐點(diǎn)成像的方法獲得放大像有所提升。
掃描電子顯微鏡樣品制備比透射電鏡樣品制備簡(jiǎn)單聽得進,不需要包埋和切片。掃描電子顯微鏡樣品的制備先進水平,必須滿足以下要求:
1.保持完好的組織和細(xì)胞形態(tài)更多可能性;
2.充分暴露要觀察的部位;
3.良好的導(dǎo)電性和較高的二次電子產(chǎn)額足夠的實力;
4.保持充分干燥的狀態(tài)。
某些含水量低且不易變形的生物材料結構,可以不經(jīng)固定和干燥而在較低加速電壓下直接觀察更適合,如動(dòng)物毛發(fā)、昆蟲溝通協調、植物種子要素配置改革、花粉等,但圖象質(zhì)量差保障性,而且觀察和拍攝照片時(shí)須盡可能迅速影響力範圍。對(duì)大多數(shù)的生物材料,則應(yīng)首先采用化學(xué)或物理方法固定新創新即將到來、脫水和干燥邁出了重要的一步,然后噴鍍碳與金屬以提高材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額。
化學(xué)方法制備樣品
化學(xué)方法制備樣品的程序通常是:清洗設施、化學(xué)固定需求、干燥、噴鍍金屬組合運用。
1.清洗:某些生物材料表面常附血液更讓我明白了、細(xì)胞碎片迎難而上、消化道內(nèi)的食物殘?jiān)⒓?xì)菌探索、淋巴液及粘液等異物堅持先行,掩蓋著要觀察的部位,因而滿意度,需要在固定之前用生理鹽水或等滲緩沖液等把附著物清洗干凈情況較常見。亦可用5%碳酸鈉沖洗或酶消化法去除這些異物。
2.固定:通常采用醛類(主要是戊二醛和多聚甲醛)與四氧化鋨雙固定機製性梗阻,也可用四氧化鋨單固定機製。四氧化鋨固定不僅可良好地保存組織細(xì)胞結(jié)構(gòu),而且能增加材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額集成應用,提高掃描電子顯微圖象的質(zhì)量探討。這對(duì)高分辨掃描電子顯微術(shù)是重要的。為增強(qiáng)這種效果高效流通,可用四氧化鋨-單寧酸或是四氧化鋨-珠叉二胼等反復(fù)處理材料調解製度,使其結(jié)合更多的重金屬鋨,這就是導(dǎo)電染色功能。
3.干燥:固定后通常采用臨界點(diǎn)干燥法應用的因素之一。其原理是:適當(dāng)選擇溫度和壓力,使液體達(dá)到臨界狀態(tài)(液態(tài)和氣相間界面消失)預期,從而避免在干燥過程中由水的表面張力所造成的樣品變形敢於監督。對(duì)含水生物材料直接進(jìn)行臨界點(diǎn)干燥時(shí),水的臨界溫度和壓力不能過高(37.4℃結構,218帕)重要的作用。通常用乙醇或丙酮等使材料脫水,再用一種中間介質(zhì)簡單化,如醋酸戊酯力度,置換脫水劑,然后在臨界點(diǎn)干燥器中用液體或固體二氧化碳系統性、氟利昂13以及一氧化二氮等置換劑置換中間介質(zhì)勇探新路,進(jìn)行臨界干燥。
4.噴鍍金屬:將干燥的樣品用導(dǎo)電性好的粘合劑或其他粘合劑粘在金屬樣品臺(tái)上傳遞,然后放在真空蒸發(fā)器中噴鍍一層50~300埃厚的金屬膜試驗,以提高樣品的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額,改善圖象質(zhì)量開展攻關合作,并且防止樣品受熱和輻射損傷切實把製度。如果采用離子濺射鍍膜機(jī)噴鍍金屬,可獲得均勻的細(xì)顆粒薄金屬鍍層,提高掃描電子圖象的質(zhì)量進行部署。
冷凍方法制備樣品
低溫掃描電子顯微術(shù)是20世紀(jì)80年代迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用的方法責任。它包括生物樣品的冷凍固定、冷凍干燥保護好、冷凍割斷和冷凍含水樣品的掃描電子顯微術(shù)等組建。
1.冷凍固定:將生物材料投入低溫的致冷劑中,如液氦特點、液氮深刻變革、液體氟利昂及丙烷等『椭C共生?焖倮鋬隹墒股锝M織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成接近于生活狀態(tài)質生產力。被冷凍固定的生物樣品,可以在低溫條件下轉(zhuǎn)移到具有低溫樣品臺(tái)的掃描電子顯微鏡中直接觀察無需進(jìn)一步處理或僅在冷凍樣品表面噴鍍一薄層金屬技術交流。這種方法不僅快速簡(jiǎn)便先進的解決方案,而且可以排除由于干燥法造成收縮的假象,特別適合于研究含水量很高的生物材料創造更多。
2.冷凍干燥:生物樣品經(jīng)冷凍固定后宣講活動,其中的水分凍結(jié)成冰,表面張力消失工藝技術;再將冷凍樣品放于真空中效率,使冰漸漸升華為水蒸氣。這樣獲得的干燥樣品在一定程度上避免了表面張力造成的形態(tài)改變近年來。
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2025第十屆華南空氣壓縮機(jī)展覽會(huì)
展會(huì)城市:佛山市展會(huì)時(shí)間:2025-05-21