葉綠素含量的測定
一防控、原理
根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收,利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度著力提升,即可用公式計算出提取液中各色素的含量深刻內涵。根據(jù)朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比重要的作用,即A=αCL式中:α比例常數(shù)貢獻。當溶液濃度以百分濃度為單位,液層厚度為1cm時穩中求進,α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)統籌。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)協同控製,則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和振奮起來。這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a利用好、b和類胡蘿卜素的含量深入各系統,只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A解決問題,并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度作用。在測定葉綠素a相互配合、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾,所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的zui大吸收峰著力增加。
二智能化、材料、儀器設(shè)備及試劑
(一)材料:新鮮(或烘干)的植物葉片處理。
(二)儀器設(shè)備:1. 分光光度計建設;2. 電子頂載天平(感量0.01g);3. 研缽助力各行;4. 棕色容量瓶前來體驗;5. 小漏斗;6. 定量濾紙應用;7. 吸水紙建議;8. 擦境紙;9. 滴管相貫通。
(三)試劑:96%乙醇(或80%丙酮)不斷發展;石英砂;碳酸鈣粉自動化方案。
三緊密協作、實驗步驟
1. 取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物效率,剪碎(去掉中脈)規模,混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g講道理,共3份發展目標奮鬥,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3ml95%乙醇更多的合作機會,研成均漿延伸,再加乙醇10ml,繼續(xù)研磨至組織變白服務好。靜置3~5min新趨勢。3. 取濾紙1張,置漏斗中共謀發展,用乙醇濕潤學習,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽應用優勢、研棒及殘渣數(shù)次高質量發展,zui后連同殘渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇高效節能,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中重要平臺。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。zui后用乙醇定容至25ml核心技術,搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)主動性。以95%乙醇為空白創造性,在波長665nm、649nm下測定吸光度道路。
四規模設備、實驗結(jié)果計算:將測定得到的吸光值代入下面的式子:Ca=13.9665-6.88A649;Cb=24.96A649-7.32A665指導。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度(Ca競爭力、Cb:mg/L),二者之和為總?cè)~綠素的濃度進一步完善。zui后根據(jù)下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量:
葉綠素的含量(mg/g)= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重(或干重)集聚。
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