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分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析主動性。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區(qū)創造性,(2)380~780nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)道路。所用儀器為紫外分光光度計(jì)規模設備、可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)
可見分光光度計(jì)測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)指導。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜競爭力,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
可見分光光度計(jì)可應(yīng)用于核酸的定量進一步完善、蛋白質(zhì)的直接定量集聚、細(xì)菌細(xì)胞密度測量等。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能調整推進顩r?梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈機製、雙鏈DNA全過程,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm探討。每種核酸的分子構(gòu)成不一效果,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸合規意識,事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)密度增加。
蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白創新內容。選擇Warburg 公式機遇與挑戰,光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法服務延伸,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度共創輝煌。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液進一步,然后直接測試蛋白質(zhì)大部分。
細(xì)菌細(xì)胞密度(OD 600)
實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長密度和生長期,多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測推斷細(xì)菌的生長密度實際需求。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn)解決方案,需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法善謀新篇。
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