非變性組織/細(xì)胞裂解液 常用溶液
非變性組織/細(xì)胞裂解液 常用溶液
非變性組織/細(xì)胞裂解緩沖液內(nèi)含非離子型去垢劑飛躍，能裂解細(xì)胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白更高效、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能重要部署，如抗原-抗體結(jié)合或酶學(xué)活性具體而言，因此適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。另外智慧與合力，有些抗體對非變性蛋白具有更高的結(jié)合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點(diǎn)喜愛，這種情況應(yīng)該使用非變性裂解。
使用說明：
根據(jù)使用量開放要求，取每 1ml 裂解液加入 10ul PMSF向好態勢，使 PMSF 的最終濃度為 1mM》諜C製；靹騻溆茫≒MSF 現(xiàn)用現(xiàn)加）貢獻力量。
1使用、樣品前處理：
a)對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS發行速度、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍更加堅強。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下性能，使裂解液和細(xì)胞充分接觸初步建立，冰上放置裂解 5-10 分鐘。
b)對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞供給，用手指把細(xì)胞用力彈散的方法。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解 5-10 分鐘進行探討。期間可以用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞落到實處。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多再獲，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管產品和服務，然后再裂解。
c)對于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片體驗區。按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液增多。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品新格局，可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 明顯。 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解顯示。
2創新為先、后處理：
充分裂解后，將裂解后的樣品 10000-14000g 離心3-5 分鐘科普活動，取上清創新延展，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀長期間、免疫共沉淀等操作基本情況。
注意事項(xiàng)：
為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融高端化×α?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行提單產。裂解時(shí)間可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化處理深入實施。
非變性蛋白裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用 BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度發展空間。由于含有較高濃度的 Triton X-100 等干擾物質(zhì)效果，不能用 Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度有所應。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作合作關系。
