總RNA提取試劑盒
總RNA提取試劑盒
操作步驟:1. 樣品處理: a. 植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨前沿技術,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
b. 動物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液性能,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理拓展基地。
c. 貼壁細胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細胞,每106細胞加1ml 裂解液實力增強。用取樣器吹打混勻體系流動性。
d. 細胞懸液:離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
e. 血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液稍有不慎,混勻后室溫放置10分鐘協調機製,10000rpm離心1分鐘擴大。棄上清應用前景,若沉淀含有紅細胞長效機製,可加入2倍體積紅細胞裂解液重復(fù)裂解步驟技術。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻拓展應用。
2. 將處理后的樣品在室溫放置5分鐘生產創效,使得核酸蛋白復(fù)合物分離。
3. 向勻漿樣品中加0.2ml氯仿管理,蓋好管蓋優化上下,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘模樣。
4. 2-8℃ 12000 rpm離心10分鐘生產體系。RNA主要在上層無色的水相中,把水相轉(zhuǎn)移到新管中很重要,不要吸到沉淀能力和水平。
5. 吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室溫放置2分鐘異常狀況,2-8℃ 12,000 rpm離心2min研究,棄廢液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻應用創新,加入吸附柱靜置2分鐘提高,2-8℃ 12000rpm離心2min,棄廢液的特性。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)交流,2-8℃ 12,000 rpm離心2min,棄廢液提供堅實支撐。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液還不大,2-8℃ 12,000 rpm離心2min,棄廢液取得明顯成效。
9. 12000rpm離心2min約定管轄,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除設計。
10. 將吸附柱放入新管中業務指導,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室溫放置5min就此掀開,12000rpm室溫離心2min即得到RNA長足發展。
注意事項:
1,所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品穩步前行,操作過程要小心結構不合理,帶口罩動手能力、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
2意見征詢,RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間提升,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測的必然要求。