超高效液相色譜UPLC使得藥學工作者可以在更短的時間大部分、更高的色譜分離度強大的功能、更少的溶劑消耗下對中藥復雜樣品進行分析測定。UPLC在中藥的化學成分識別解決方案、指紋圖譜及代謝組學等分析領域逐步得到了應用優勢,促進了中藥的質(zhì)量評控。
超高效液相色譜UPLC與不同檢測器聯(lián)用在中藥分析中的應用
1. UPLC與UV增產、ELSD聯(lián)用在中藥指紋圖譜與定量分析中的應用
超高效液相色譜UPLC與不同檢測器聯(lián)用便利性,可以對含不同化學類型的中藥進行研究方法,尤其是結合指紋圖譜技術在中藥質(zhì)量評價中顯示出了亮眼的優(yōu)勢。比較土茯苓藥材的UPLC-UV和HPLC-UV指紋圖譜提供有力支撐,結果顯示HPLC需要75 min才能完成分析切實把製度,而UPLC在10 min內(nèi)完成了色譜分離,大大節(jié)省了分析時間最深厚的底氣。采用UPLC-UV法對大黃中5種蒽醌衍生物進行分析測定協同控製,結果顯示HPLC需要30min才能完成分析,而UPLC在3min內(nèi)即完成色譜分離品質,分析效率提高了10倍利用好。針對HPLC難以分離的紅參類藥材,開展了基于UPLC-UV的紅參研究解決問題,得到了高分離度和高純度的色譜指紋圖譜系列,該研究建立的方法具有專屬性強、分離度高相互配合、色譜峰純度高的特點慢體驗,可用于人參類藥材的品種鑒定和質(zhì)量控制。
針對一些含皂苷類或化學成分無紫外吸收的中藥智能化,UPLC-ELSD則優(yōu)勢盡顯了解情況。采用UPLC-UV-ELSD法對6個產(chǎn)地28個批次西洋參藥材的指紋圖譜進行聚類分析、主成分分析及相似度評價等研究技術研究,為西洋參藥材的品質(zhì)評價提供了參考方法重要的。建立了UPLC-ESLD法同時測定北柴胡藥材中柴胡皂苷a、c姿勢、d的含量相互融合,是評價北柴胡藥材質(zhì)量的一種較好的方法。建立超聲輔助固液萃取與UPLC-ELSD相結合同時提取和測定天然牛黃和替代品中6種膽汁酸含量的方法綠色化,測定結果顯示不同需求,這些樣品的內(nèi)在質(zhì)量存在一定差異。利用UPLC-ELSD指紋圖譜分析和測定生物堿來研究貝母硫熏蒸過程的潛在破壞作用保持穩定,該研究表明硫熏蒸對樣品中的主要活性成分損失較大總之。
2. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中成藥指紋圖譜與定量分析中的應用
由于中成藥的化學成分比單味藥材的化學成分更加復雜支撐作用,常規(guī)HPLC往往在較短的時間內(nèi)很難獲得分離度較高的色譜圖工藝技術,超高效液相色譜UPLC的高分離度幫助藥學工作者可以更好地應對分離中成藥中復雜成分的挑戰(zhàn)。利用UPLC-UV對益*草顆粒和益*草膏中的益母草堿進行了含量測定規模,進一步完善了益母草制劑的質(zhì)量控制方法近年來。運用UPLC-UV對葛根芩連湯中11種成分進行了含量測定,結果表明新建立的質(zhì)控方法具有更好的質(zhì)量評控力發展目標奮鬥。運用UPLC-UV比較了三七原料藥和顆粒劑中5種成分的含量差異技術先進,定性更多的合作機會、定量地評價了三七不同產(chǎn)品的質(zhì)量信息,獲得比較滿意的結果認為。建立UPLC-DAD-ELSD切換波長法并應用于酸棗仁顆粒中8種成分的含量測定服務好,對酸棗仁顆粒的質(zhì)量控制評價提供了參考方法。利用UPLC-UV建立了復方芪麻膠囊的指紋圖譜反應能力,并定量測定了8種成分共謀發展,建立了該制劑一種比較全面的質(zhì)量評價方法。利用UPLC-UV建立了葛*芩*丸的指紋圖譜及7種成分的定量測定方法結構重塑,與之前單一質(zhì)控標準相比聽得懂,提升了其質(zhì)量控制水平。
3. UPLC與MS聯(lián)用在中藥/中成藥成分辨識中的應用
超高效液相色譜UPLC與質(zhì)譜(mass spectrometer高質量發展,MS)檢測器聯(lián)用可以改善質(zhì)譜檢測結果的質(zhì)量全方位。由于低流速下色譜峰擴散較小,增加了峰濃度更默契了,有利于提高離子源的效率先進技術。同時UPLC強大的分離能力有助于目標化合物和與之競爭電離的雜質(zhì)峰的分離,從而使MS的靈敏度由于離子抑制現(xiàn)象的減弱而得到進一步的提高不合理波動。故UPLC與MS聯(lián)用可以獲得靈敏度更高宣講手段、質(zhì)量更好的信息,在提高分離效能積極拓展新的領域、縮短分析時間的同時大大提高了檢測靈敏度配套設備,有利于中藥或中成藥中復雜成分的分析。
運用UPLC-Q-TOF-MS快速分析了人參根中的皂苷類化合物多種方式,共鑒定出27種化合物,新建立的方法成功地應用于分析同一產(chǎn)地技術創新、不同生長時間的人參干燥主根中皂苷的差異深入交流研討。運用UPLC-Q-TOF-MS對未加工和加工的黃連進行了化學成分分析,共鑒定出了13種化合物廣泛應用,其中有3種是初檢測出關註度,結合主成分分析結果表明2種不同加工方式的黃連化學成分存在顯著差異。在參*扶正注*液中運用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS分離鑒定了81個主要成分哪些領域,包括有機酸敢於挑戰、氨基酸、寡糖和生物堿等建立和完善,為該制劑的質(zhì)量評控奠定了基礎提供了遵循。建立了HPLC-Q-TOF-MS快速鑒定三葉青化學成分的方法,并用UPLC-Q-MS測定三葉青中4種成分的含量大型,結果表明建立的UPLC-Q-MS定量分析方法快捷服務效率、準確明確相關要求,為綜合評價三葉青的質(zhì)量提供參考。運用UPLC- DAD-Q-TOF-MS對連**瘟膠囊的主要成分進行定性統籌發展、定量分析深化涉外,通過比較保留時間和精確質(zhì)量測定及參考化合物或文獻數(shù)據(jù),初步確定了包括類黃酮生產製造、苯丙素類開展試點、蒽醌類、三萜類等61種化合物共同。運用UPLC-Q-TOF-MS分析了不同產(chǎn)地泥附子的化學成分差異推進一步,為從次生代謝產(chǎn)物多樣性揭示附子道地性的形成機制提供了新的參考。運用UPLC-Q-TOF-MS對3種不同種類升麻的化學成分進行快速分析應用創新,共鑒定出32種共有組分以及8種不同成分提高,為進一步研究3個不同品種的升麻提供了參考。運用UPLC-TQ-MS法研究了丹*軟膠囊中不同活性成分的溶出規(guī)律的特性,為該中成藥的質(zhì)量評控提供了參考交流。
4. UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學分析中的應用
代謝組學是目前研究中藥藥理作用機制和發(fā)現(xiàn)活性成分的手段之一,UPLC-MS技術為中藥代謝組學分析提供了技術平臺提供堅實支撐。超高效液相色譜UPLC可與多種類型的質(zhì)譜串聯(lián)還不大,高分辨質(zhì)譜包括飛行時間(TOF)、四極桿-飛行時間(Q-TOF)信息化技術、串聯(lián)飛行時間(TOF-TOF)及離子阱-飛行時間(IT-TOF)質(zhì)譜等發揮作用。UPLC與高分辨質(zhì)譜串聯(lián)可應用于中草藥非靶向代謝組學的研究,尤其是UPLC-Q-TOF/MS能夠更好地用于代謝物和同分異構體的分離鑒定逐步顯現。此外銘記囑托,UPLC還可與三重四級桿或四極桿離子阱(Q-IT)等串聯(lián)應用于中藥靶向代謝組學分析。目前自動化裝置,新型的串聯(lián)質(zhì)譜如四極桿線性離子阱(Q-Trap)質(zhì)譜由于具有較強的定性和定量能力示範,與UPLC聯(lián)用在中藥非靶向代謝組學及靶向代謝組學方面逐漸得到應用。研究嶺南山竹子Garcinia oblongifoliaChamp.ex Benth. 的葉有很大提升空間、枝和果實的比較代謝譜和生物活性運行好,使用UPLC-Q-TOF/MS共鑒定了40種化合物,結合化學計量學分析可能性更大,揭示了所研究的3種植物代謝物譜的變化和生物活性差異相關聯(lián)部署安排,表明UPLC-Q-TOF/MS可用于鑒定在單個物種的不同部位中差異表達的生物活性成分。提出了一種基于目標糖組學和非靶向代謝組學策略的綜合色譜技術技術,利用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS同時分離鑒定地黃的碳水化合物和次級代謝物取得了成功推廣開來,并進一步闡明了碳水化合物和次級代謝產(chǎn)物的化學轉化機制,從而揭示了碳水化合物和次生代謝產(chǎn)物之間固有的化學聯(lián)系相對較高。利用UPLC-MS背景扣除法聯(lián)合代謝組學技術研究了柴胡-白芍藥對配伍前后化學成分的整體變化情況重要的,從整體化學組成上比較了柴胡-白芍藥對配伍前后的差異開展研究,為其配伍機制的闡釋奠定了基礎。利用基于超高效液相色譜/電噴霧電離synapt高清質(zhì)譜(UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS)結合模式識別方法研究了酸棗仁湯治療失眠癥的代謝特征和治療效果相互融合,鑒定出20種離子作為“分化代謝物"首要任務,結果表明酸棗仁湯的治療效果可能通過5-羥色胺能激活介導實現(xiàn),該研究結果還表明UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS技術可用于中藥的代謝物分析不同需求,開辟了使用代謝組學解決特殊中藥問題的新視角形式。利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技術對復方祖*麻片抗類風濕關節(jié)炎的血漿代謝組學進行研究,結果表明復方祖*麻片主要通過下調(diào)繼發(fā)性病變期溶血磷脂酰*堿的水平而達到治療效果支撐作用。
由于樣品組分的分離在先日漸深入,離子化和檢測在后,因而能夠有效地減少干擾同時,諸如基質(zhì)效應互動式宣講、離子化抑制、離子化競爭等模式,大幅度增加代謝物的鑒別數(shù)量和準確度自動化。UPLC-MS除了分析速度快、樣品無需衍生化等優(yōu)點高品質,UPLC的高分離度使得峰寬變窄不折不扣、信噪比增強,從而提高了生物樣品分析的選擇性和靈敏度資源優勢。因此高效利用,與傳統(tǒng)HPLC相比,UPLC能獲得中藥更多代謝物的信息估算,對于復雜生物樣品的分離具有顯著優(yōu)勢講理論,UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學研究中將發(fā)揮越來越重要的作用。
5. UPLC與MS聯(lián)用在中藥真菌毒素分析中的應用
目前中藥的安全性檢測受到越來越多的關注和研究不要畏懼,但是中藥含有真菌毒素往往是微量(1~100 μg/g)服務為一體、痕量(0.01~1 μg/g)級別,常規(guī)分析手段往往很難到達檢測限和定量限大大縮短。超高效液相色譜UPLC與MS聯(lián)用帶來的高靈敏度幫助藥學工作者可以很好地定量分析中藥中的真菌毒素要落實好。建立了一種基于QuEChERS-UPLC-Q-MS/MS法定量測定白茅根中16種真菌毒素緊密相關,充分利用UPLC的高分離度更默契了,獲得了較好的結果。建立了UPLC-MS/MS法同時測定麥芽中11種真菌毒素的污染水平培訓,通過相同保留時間處的特征離子二級碎片排除了假陽性結果不合理波動,檢測限和定量限分別為0.05~30.00 μg/kg和0.15~87.50 μg/kg,表明該方法可以準確重要工具、靈敏積極拓展新的領域、快速地監(jiān)測麥芽受真菌毒素污染的狀況配套設備。使用UHPLC-MS/MS法測定淡豆豉、麥芽競爭力所在、薏苡仁和酸棗仁中黃曲霉毒素的含量引人註目,結果顯示不同藥材的黃曲霉毒素G2、G1溝通機製、B2好宣講、B1的檢出限分別為0.04~0.1 μg/kg、0.01~0.02 μg/kg領先水平、0.01~0.03 μg/kg和0.02~0.03 μg/kg,表明了該方法具有較高的靈敏度。采用UPLC-MS/MS法對三七戰略布局、黨參和柴胡中的黃曲霉毒素進行了檢測事關全面,該研究表明分離條件對分離結果有一定影響,3種藥材中曲霉屬真菌的污染值應得到重視狀態。建立了一種基于ESI-LC/MS同時檢測三七藥材中10 種真菌毒素方法技術節能,結果表明該方法凈化效果好、靈敏度高基石之一、重復性好聯動,適用于成分復雜的三七藥材中多種真菌毒素的定量檢測。對決明子共同努力、菟絲子行業內卷、薏苡仁等12種藥材種子中黃曲霉毒素G2、G1逐漸完善、B2參與能力、B1和赭*霉*素A進行了測定,結果發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素B1是目前主流、B2充分發揮、G1、G2和赭*霉*素A在12種藥材種子中的檢出率較低充分發揮,但一旦檢測到即為高水平選擇適用。實現(xiàn)快速、準確地同時測定多種真菌毒素一直是中草藥分析領域的熱點和難點設計,UPLC-MS/MS聯(lián)用技術將會越來越多地應用于中藥的真菌毒素分析業務指導。
在實際應用中由于UPLC使用的色譜柱柱填料較小,為防止堵塞就此掀開,樣品前處理要求更加嚴格長足發展。超高效液相色譜UPLC是在HPLC的基礎上發(fā)展起來的,由于UPLC能夠提高色譜分離度、縮短分析時間實施體系、提高分析效率組建、節(jié)省溶劑消耗,同時提供智能化的分析效果較好,確保分析數(shù)據(jù)的可靠性和高效率重要的意義,因此將成為中藥分析領域的主要分析手段,其應用將會越來越多等多個領域。
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