PM2.5 標(biāo)準(zhǔn)品 SRM1649b相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析方法:
1.多環(huán)芳烴化合物對(duì)表皮真皮細(xì)胞毒性效應(yīng)分析:永生化的皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞 HaCaT 細(xì)胞和皮膚成纖維細(xì)胞,NHDF 細(xì)胞為研究對(duì)象,以國際準(zhǔn)品空氣顆粒性污染物多環(huán)芳烴化合物 SRM1649b 潯出液為刺激物發揮。研究不同時(shí)間條件下(0 小時(shí)顯著、6小 時(shí)、12小時(shí)與時俱進、24小時(shí)性能,36 小時(shí),小時(shí))不同濃度 SRM1649b 對(duì) HacaT 細(xì)胞和 NHDF 細(xì)胞增殖活性的影響綜合運用。傳代 HacaT 細(xì)胞和 NHDF 細(xì)胞組建,顯微鏡下觀察有 70-80%的紐融合時(shí)用于實(shí)驗(yàn)各有優勢,吸去原培養(yǎng)液,加入專用培養(yǎng)基重要的意義,稀釋 SRM1649b,使其終濃度為(0等多個領域、50再獲、100、200應用擴展、400ug/mL)體驗區,在不同濃度,不同時(shí)條件下避光孵育活動上,用 CCK8 法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)和濃度孵育 SRM1649b 對(duì) HaCaT 細(xì)胞和 NHDF 細(xì)胞增殖活性的影響; 從而探索出不同濃度不同時(shí)間點(diǎn) SRM1649b 浸出液對(duì) HaCaT 及 NHDF 細(xì)胞生存率 的影響并選擇適宜的實(shí)驗(yàn)濃度有望。
2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PM2.5 標(biāo)準(zhǔn)品 SRM1649b 對(duì) HaCaT 和 NHDF 的細(xì)胞周期,及凋亡的影響導向作用。 采用細(xì)胞免疫熒光法觀塞 空氣顆粒性污染物多環(huán)芳烴合物 SRM1649b 浸出液刺激前后 HaCaT 和 NHDF 細(xì)胞內(nèi)芳香族化 合物受體 AhR 的分布變化;
3.用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法檢測(cè)各濃度實(shí)驗(yàn)組 HacaT 和 NHDF 細(xì)胞中基質(zhì)金屬 蛋白酶 MMP1方案,MMP3,MMP9 的 mRNA 表達(dá)情況十大行動。用Western-blot 方法檢測(cè)各濃度實(shí)驗(yàn) 組 HaCaT 和 NHDF 細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP1 蛋白表達(dá)情況左右。用 ELISA 法檢測(cè)基質(zhì) 金屬蛋白酶
MMP1 蛋自的細(xì)胞外分泌情況:
4.實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 和 Western-blot 方法檢測(cè) PAHS(SRM1649b 浸出液)與受 體(AhR)結(jié)合后引起的胞漿及核內(nèi)下游靶基因的變化括 ERK1/2, c-Jun 等調(diào)控 分子的磷酸化水平,以及 CYP1A1 等下游靶基因的 mRNA 表達(dá)水平:5.空氣顆粒性污染物多環(huán)芳烴化合物 SRM1649b分析加入 AhR 受體拮抗劑后對(duì) HaCaT 和 NHDF中 MMP1綜合措施,CYP1A1 等表 達(dá)的影響可靠保障。
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