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非洲豬瘟試劑盒 -一款農業(yè)部批準的試劑盒@2022已更新【?????? ??? - ???? ??? ??? @2022 ???? ??】也是我國重點防范的一類動物疫情註入新的動力。其特征是發(fā)病過程短領先水平，最急性和急性感染死亡率高達100%，臨床表現為發(fā)熱（達40～42℃）雙重提升，心跳加快戰略布局，監(jiān)測非洲豬瘟病毒成為豬瘟的檢測方法。

非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒使用說明書

（快提核酸擴增試劑盒）

【產品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預期用途］

本試劑盒主要用于檢測疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸表現明顯更佳，適用于非洲豬瘟病毒的檢測狀態、輔助診斷和流行病學調查。

【試劑盒組分】

1指導、試劑盒組成及貯藏條件

2新的動力、需自備材料：生理鹽水、無菌槍頭發展契機、熒光PCR專用反應管廣泛關註、記號筆等。

【操作步驟】

一發力、樣品制備

1優勢領先、 血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號備用共創美好。

2推動並實現、 組織樣品：采集脾臟、肝臟覆蓋範圍、淋巴結優化程度、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大小）奮勇向前，眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨不斷豐富，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘組建，取上清液于滅菌離心管中各有優勢，編號備用。

二重要的意義、DNA提取

取反應液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管持續，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘占，加入反應液B 20μL,吹打混勻即可高質量，若為抗凝全血提供了有力支撐，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

二前景、PCR擴增

1進一步意見、配液：取出PCR反應液、酶混合液共享應用，在室溫*融化后生產能力，充分混勻，瞬離示範推廣，可將酶混合液全部取岀直接加入到PCR反應液中處理方法，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用持續向好；或按照每份PCR反應液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗用量習慣，混合兩種反應液,瞬離后按照每份20μL分裝到專用熒光PCR 反應管中，剩余試劑立即凍存進展情況；（操作過程要注意避光）

2的積極性、加樣擴增：分別向上述PCR反應管中加入5μL樣本 DNA或陰性對照或陽性對照，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運行以下程序：

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個循壞的55°C時收集熒光信號至關重要。設置擴增體系為25μL,同時要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式不久前。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說明書中的反應程序設置后因持溫時間短無法運行,可將預擴增和PCR擴增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒。)

【結果判定】

1提升行動、 基線和閾值設定能力建設；基線調整取6-15個循環(huán)的熒光信號，閾值設定以閾值線剛好超過陰性對照檢測 熒光曲線的最高點為原則研究進展。

2無障礙、 質量控制：反應結束后，陰性對照的檢測結果應無特定的擴增曲線互動互補，Ct值為＞38或無發揮重要帶動作用；陽性對照 的Ct值應≤30.0,且明顯的擴增曲線；否則實驗視為無效意料之外。

3、 樣品判定：待檢樣品熒光信號有指數型增加形式，且結果顯示Ct值<35.0,報告為陽性置之不顧；未檢測到Ct 值或Ct值＞38或無明顯擴增曲線，則樣品判定為陰性數字化。35≤Ct值≤8時方便，復檢一次，重復結果為陽性者判定為陽性各領域，否則判定為陰性應用領域。

【注意事項】

1保持競爭優勢、實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按照操作步驟執(zhí)行發展機遇，在操作過程中對時間長效機製、試劑體積等精 確控制可以獲得好的結果。

2穩定、 實驗室應嚴格按照有關規(guī)定分區(qū)管理改造層面。各區(qū)間人員、器材優勢與挑戰、試劑及空氣流向應有產格要求經驗分享。

3、 有關耗材確保潔凈趨勢、無菌有力扭轉，核酸提取完成后盡快進入下一步試驗或冷凍保存。

4一站式服務、預混后的試劑應盡量在短期內使用完畢發展需要，戶外使用應在加冰袋的泡沫盒保存，每日試驗完畢應及時 冷凍保存管理。

5顯示、 對于熒光PCR管要避免徒手或使用過的手套接觸，檢測過程中使用不帶熒光物質一次性乳膠手套效率和安。

6設計能力、 凍存試劑使用前應于室溫下*融化，充分混勻深入開展，瞬時離心使液體*沉于管底更為一致。

7、 樣品技術的開發、陰性對照封蓋后研究與應用，在通風環(huán)境添加陽性對照并及時封蓋，避免組分間及氣溶膠等假陽性污染更高效。

8全面協議、 擴增反應完畢后的PCR管嚴禁開蓋,應和試驗產生的其它廢棄物一起及時收集,遠離PCR實驗室 進行無害化處理。

【規(guī)格】50頭份/盒具體而言。

【貯藏與有效期】-20°C以下避光保存工具，有效期12個月。

僅供獸醫(yī)診斷使用