ELISA是一個間接的檢測過程信息，這在很多文獻資料上都有這樣的記載發揮作用。但是很少有研究資料詳細的描述間接測量的信號傳遞過程要落實好，以及傳遞過程中出現(xiàn)的偏差緊密相關。這里小編從宏觀和微觀兩個角度對ELISA進行系統(tǒng)分析，該分析有助于搭建穩(wěn)定的ELISA平臺先進技術，并正確地使用和評估不同性質(zhì)的酶聯(lián)抗體和顯色液等通用材料培訓。

宏觀上來講，ELISA檢測的函數(shù)曲線在實際操作過程中描述的是劑量濃度的抗體和信號之間的相關(guān)關(guān)系搶抓機遇，而其實質(zhì)是為了描述劑量濃度的抗體和對應(yīng)抗原-抗體偶聯(lián)物之間的相關(guān)關(guān)系分析。抗原-抗體偶聯(lián)物經(jīng)過了酶聯(lián)抗體反應(yīng)和酶催化放大反應(yīng)全面闡釋，催化產(chǎn)物檢測后轉(zhuǎn)換成信號非常激烈。該信號間接的代表了抗原-抗體偶聯(lián)物。這種間接的轉(zhuǎn)化過程經(jīng)歷了三重信號的傳遞過程引人註目，而只有在三重傳遞保證線性的情況領域，抗體濃度-信號劑量曲線才能等同于抗體濃度-抗體抗原偶聯(lián)物濃度劑量曲線，如果進行了非線性傳遞將會影響到整個檢測方法的真實性和準確性好宣講，下面小編將從微觀角度簡單介紹下信號傳遞過程中可能存在的偏差註入新的動力。

1.信號檢測偏差：酶催化產(chǎn)物轉(zhuǎn)換成信號時有可能會產(chǎn)生的偏差，這個偏差在一些文獻中也稱之為儀器的非線性檢測區(qū)域，即當(dāng)酶催化產(chǎn)物濃度過高時雙重提升，催化產(chǎn)物濃度和信號值之間不*呈線性關(guān)系，這個現(xiàn)象是普遍存在的事關全面，如圖3所示某品牌酶標(biāo)儀的參數(shù)性能表現明顯更佳，注意該儀器的測量范圍是0-4 OD，而該儀器確保的檢測線性范圍是0-3 OD技術節能。一般來講在進行吸光度法讀數(shù)時穩定發展，檢測的信號值gao值控制在3左右。如果兩個相鄰的抗體濃度點對應(yīng)的信號值在OD值3.5及以上時都會特別接近聯動，這兩個信號值很有可能是有信號傳遞偏差的。這個可以通過高濃度的酶催化產(chǎn)物梯度稀釋查看信號的線性范圍確認共同努力。

2.酶催化反應(yīng)傳遞偏差：該偏差是由酶催化顯色液引起的行業內卷，其實質(zhì)是酶聯(lián)抗體的濃度和其對應(yīng)催化產(chǎn)物的濃度是否線性相關(guān)追求卓越。如圖4所示由于酶催化反應(yīng)在未終止前是一個持續(xù)反應(yīng)的信號放大過程，信號的產(chǎn)生是時間的累積量參與能力，在反應(yīng)過程中酶活可能會喪失（左）合理需求，顯色液的有效成分在不斷的減少時，梯度濃度的酶催化反應(yīng)在反應(yīng)時間內(nèi)的可能不會是勻速反應(yīng)狀態(tài)（右）充分發揮。

這個可以通過動力學(xué)讀數(shù)進行確認高質量。目前市面上有多種顯色液可供選擇，顯色能力強和弱的產(chǎn)品信號差異可能達到20-50倍選擇適用，需要根據(jù)實驗的目的正確的選擇顯色液并確認酶催化過程的線性傳遞共創美好。

3.酶聯(lián)抗體反應(yīng)傳遞偏差，即酶聯(lián)抗體和抗體抗原偶聯(lián)物反應(yīng)后薄弱點，酶聯(lián)抗體-抗原抗體偶聯(lián)物的濃度能否線性的代表抗體抗原偶聯(lián)物的濃度覆蓋範圍。這個比較復(fù)雜的過程，主要是因為酶聯(lián)抗體的異質(zhì)性導(dǎo)致的積極性，酶聯(lián)抗體多為多抗奮勇向前，該抗體偶聯(lián)上的HRP分子數(shù)目也存在差異，很難用單一的實驗去論證這個線性過程實施體系。但值得注意的是組建，酶聯(lián)抗體加入反應(yīng)濃度應(yīng)該遠大于抗體抗原偶聯(lián)物的濃度，這樣能夠保證基本所有的抗體抗原偶聯(lián)物都被轉(zhuǎn)換成酶聯(lián)抗體-抗原抗體偶聯(lián)物效果較好，酶聯(lián)濃度加入過少會導(dǎo)致劑量曲線的高濃度點出現(xiàn)假平臺期重要的意義，影響實驗的結(jié)果；酶聯(lián)濃度過高可能會導(dǎo)致非特異信號的增加開放以來，還有酶聯(lián)濃度的增加會導(dǎo)致信號的增加占，可能會導(dǎo)致信號值超過線性檢測范圍。所以酶聯(lián)濃度的反應(yīng)濃度是一個值得選擇的參數(shù)提供了有力支撐。