JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞   100μl×10支

JM109化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞       100μl×20支 

本公司生產(chǎn)的JM109感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌JM109菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞多種，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化開放以來。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108分析，-70℃保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變表示。

基因型：recA supE44 endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB)  F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]

特  點(diǎn)：一種琥珀抑制型F’重組缺陷菌株。支持M13噬菌體載體的生長創造，對(duì)轉(zhuǎn)染的DNA有修飾作用不難發現，但無限制作用。該菌株中的F’帶有l(wèi)acZΔM15設備製造，后者使得與在λZAP中編碼的β-半乳糖 苷酶氨基端進(jìn)行α-互補(bǔ)發展需要，可用于藍(lán)白斑篩選。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1管理、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化顯示，以下實(shí)驗(yàn)以100ul感受態(tài)細(xì)胞為例。

2效率和安、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA設計能力，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物範圍，冰浴放置30分鐘求得平衡。

3、將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒空間廣闊，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘至關重要，注意不要搖動(dòng)離心管。

4服務品質、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基的發生，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時(shí)組成部分。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇新的動力。

5的過程中、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)廣泛關註。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整促進進步，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul左右轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板優勢領先；反之迎來新的篇章，如果轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板推動並實現。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長薄弱點。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液優化程度，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中重要性。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板多種場景。

注意事項(xiàng)：

1多元化服務體系、收到感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融使用，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低大幅拓展。

2、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作更加堅強，防止其它DNA的污染與時俱進，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響初步建立。

3綜合運用、轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比的方法，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率實事求是。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4落到實處、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量

5服務水平、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物技術創新，以重新轉(zhuǎn)化處理方法，將損失將到低。